microrna-126对人肝细胞糖代谢影响的机制研究

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1、学校代码10459学号或申请号201212443193密级公开硕士学位论文MicroRNA-126对人肝细胞糖代谢影响的机制研究作者姓名：胡志为导师姓名：栗夏莲教授学科门类：医学专业名称：内科学（内分泌学）培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectsofMicroRNA-126onGlucoseMetabolisminHumanLiverCellsByZhiweiHuSupervisor:XialianLiDepartmen

2、tofEndocrinologyandMetabolismTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：•秘日期：㈧丨土年月巧日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑

3、州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：〒F1期••>士年月％曰摘要MicroRNA-126对人肝细胞糖代谢影响的机制研究研究生胡志为导师栗夏莲郑州大学第一附属医院内分泌科河南郑州450052摘要背景随着生活节奏的加快

4、，生活水平的提高，在人们的生活方式发生巨大变化的同时，代谢性疾病的发病率也在全世界范围内逐年攀升，其中糖尿病是代谢性疾病中最常见的一种。在2型糖尿病的发生发展过程中，肝脏、肌肉、脂肪等组织对胰岛素反应能力下降甚至抵抗胰岛素的作用，继而会引起一些如肥胖、多囊卵巢综合症、高脂血症及动脉粥样硬化等疾病。肝脏是糖代谢的重要器官，胰岛素主要通过胰岛素受体底物（IRS）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K)/蛋白激酶B（Akt）信号传导通路影响肝脏的糖代谢，然而肝脏胰岛素抵抗的发病机制，目前仍不明确。MicroRNAs（miRNAs）是一类短小的、非编码的微小RNAs，对维持机

5、体自身稳态的平衡、疾病的产生和发展过程中有着重要影响，它们与靶信使RNA(mRNA)的3’非翻译区(3’-UTRs)结合，抑制编码蛋白基因的转录后表达。MicroRNA-126不仅在内皮细胞中含量丰富，在凋亡小体中的表达也很高，国内外的研究发现，在糖尿病动物模型以及在糖尿病患者的血浆中，MicroRNA-126的表达量明显降低，因此我们认为MicroRNA-126可能与糖尿病的发生与发展有联系。Regazzi等人提出MicroRNAs不仅可以作为早期疾病发生的标志物，而且还可以是细胞间传递信息的信使，导致疾病进展的原因，本实验将对MicroRNA-126对肝细

6、胞糖代谢影响的机制进行研究。I摘要目的本研究通过对来源于肝脏的永生非肿瘤细胞系——张氏肝细胞转染MicroRNA-126类似物、抑制物及其阴性对照序列，改变细胞内MicroRNA-126的表达量，并测定转染后细胞内胰岛素信号传导通路中相关蛋白（IRS-1、PIK3R2、Akt-2、p-Akt-2）的表达水平，旨在探讨MicroRNA-126对人肝细胞糖代谢功能影响的机制。材料和方法1．用含有10%胎牛血清、1%青链霉素的培养基培养张氏肝细胞（Changlivercell），置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。2.荧光显微镜下确定细胞的最佳转染条件：取

7、对数生长期的张氏肝细胞以55×10/孔接种于24孔板中，细胞密度生长至70%时，用脂质体Lipofectamine2000转染不同浓度（20nmol/L、40nmol/L、80nmol/L）的荧光标记的阴性对照序列（FAM-NC及inhibitorFAM-NC），6小时后在荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光强度，确定细胞最佳转染浓度。3．将研究对象分为6组：MicroRNA-126类似物组、MicroRNA-126抑制物组、MicroRNA-126类似物阴性对照组、MicroRNA-126抑制物阴性对照组、转染试剂组和正常对照组。用脂质体Lipofectamine

8、2000将人工合成核苷酸序列（Micr