microrna126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响

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1、学校代码10459学号或申请号201212443192密级公开硕士学位论文MicroRNA126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响作者姓名：何亚非导师姓名：栗夏连教授学科门类：医学专业名称：内科学培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2015年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofMicroRNA126onGlucoseMetabolismintheNormalLiverCellLinesBy:YafeiHeSupervisor:Prof.XialianLiSpeciality:En

2、docrinologyCollege:ClinicalmedicinedepartmentTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityApril，2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：yf可日期：》0朽年今月对日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识

3、产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：^日期：2#年$月对日摘要MicroRNA126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响研究生何亚非导师栗夏连教授郑州大学第一附属医院内分泌科中国郑州450052摘要背景：糖尿病是

4、一种复杂的代谢紊乱性疾病，血糖代谢紊乱是其主要特征。研究表明，葡萄糖的代谢紊乱可能与高血糖代谢记忆、炎症反应以及线粒体功能异常有关，但有关糖尿病的具体发病机制，到目前仍不明确。MicroRNAs（miRNAs）是一类序列短小的、进化上高度保守的、非编码的RNA，由20-25个单核苷酸组成。miRNAs通过与靶基因3’非编码区结合，导致mRNA降解或直接抑制mRNA的翻译，对基因转录后进行调控，从而参与许多生理病理过程的精细调节。研究发现，miRNAs在细胞增殖和凋亡、炎症反应、信号传导、细胞代谢以及肿瘤的发生发展过程中起到至关重要的作用。大量的[1]实验证据表明，miRNAs

5、在维持机体葡萄糖的稳态和糖尿病的发展中有重要的调节作用。AnnaZampetaki等人发现在糖尿病患者的血浆中microRNA126（miR-126）的相对表达量明显降低，提出miR-126能准确鉴别糖尿病高危者和健康人，可以作为糖尿病疾病发展的标志物。同时，我课题组在前期研究发现，miR-126在1型和2型糖尿病患者血浆中水平降低，其表达水平与炎症反应以及脂代谢紊乱等多种糖尿病危险因素相关。肝脏是人体主要的葡萄糖代谢场所，在糖尿病的发生发展中起着至关重要的作用。miR-126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的具体作用如何呢？本研究针对改变changliver细胞miR-126的表达

6、量，以探讨miR-126表达水平改变时对细胞胰岛素反应的敏感性和葡萄糖代谢的影响，以进一步了解糖尿病的发病机理。IV摘要材料和方法：1．Changliver细胞分为3组，正常对照组、negativecontrolFAM（NC-FAM）组、microRNAinhibitorNC-FAM（IN-NC-FAM）组，分别用不同浓度10、20、40、80nM在lipofectamine2000（Lip2000)作用下转染细胞，确定最佳转染条件。2．将changliver细胞分为6组，分别为microRNA126mimic(miR-126)组、negativecontrol（NC）组、m

7、icroRNA126inhibitor(In-miR-126)组、microRNAinhibitornegativecontrol（In-NC）组、lipofectamine2000（Lip2000）组和正常细胞对照组，按照上述优化的转染条件将对应的人工合成的核苷酸序列转染入相应的细胞组。3．实时荧光定量聚合酶联反应（qRT-PCR）检测各组细胞miR-126表达水平。4．将步骤2中各组细胞转染后培养48h，用人工合成胰岛素（100nM）刺激12小时，用GOD-POD法测上清葡萄糖浓度，BCA法测板下层