elf5抑制tgf-β诱导的前列腺癌上皮间质转化的机制研究

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1、分类号：R737.25学校代码：10062密级：学号：2012601050博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Elf5抑制TGF-β诱导的前列腺癌上皮间质转化的机制研究TITLEElf5InhibitsTGF-β-DrivenEpithelial-MesenchymalTransitioninProstateCancerbyRepressingSMAD3Activation一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文作者：姚丙指导教师：徐勇教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R737.25学校代码：10062密级：学号：2012601050学位类别：科

2、学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Elf5抑制TGF-β诱导的前列腺癌上皮间质转化的机制研究TITLEElf5InhibitsTGF-β-DrivenEpithelial-MesenchymalTransitioninProstateCancerbyRepressingSMAD3Activation一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文作者：姚丙指导教师：徐勇教授导师组成员：张志宏刘冉录天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中

3、特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：

4、年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的探讨Elf5在TGF-β诱导的前列腺癌上皮间质转化的相关机制。方法收集并纳入124例前列腺癌病理样本，通过免疫组化染色（IHC）和ImageJ软件分析Elf5与E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的关系。在几种常见前列腺癌细胞系中WesternBlot检测Elf5的表达，在LNCaP细胞中用siRNA瞬时转染将Elf5沉默使其低表达，在22Rv1细胞中通过HA-Elf5转染将Elf5稳定地高表达；在有/无TGF-β处理的情况下，分组观察LNCaP和22Rv1细胞的形态学变化，同时WesternBlot检测这些分组之间E-钙粘蛋白以及反映EMT的生物标志

5、物如N-钙粘蛋白、Snail1、Snail2和ZEB1表达量的变化。对LNCaP和22Rv1细胞进行球形成实验和迁移实验观察其锚定-非依赖生长和迁移侵袭能力是否增加。用荧光素酶报告基因实验(Luciferase)将CAGA12或PAI-1报告基因质粒分别在HEK293和22Rv1细胞中和HA-Elf5共转染，在LNCaP细胞中和siElf5共转染，然后用TGF-β处理并测定荧光素酶活性来判断Elf5是否调节TGF-β信号转导。在LNCaP细胞中检测内源性p-SMAD2、SMAD2、p-SMAD3、SMAD3和Elf5的表达并在22Rv1细胞中验证。在无内源性表达Elf5和SMADs的HE

6、K293细胞中分组共转染HA-Elf5质粒及Flag标记的vector、SMAD2、SMAD3或SMAD4质粒，免疫共沉淀判断Elf5是否与SMADs结合，并在内源性表达Elf5和SMADs的LNCaP细胞中进一步验证。最后，对原发前列腺癌病理样本进行p-SMAD3和TGF-β染色，分析p-SMAD3阳性率，并对Elf5和p-SMAD3与疾病进展结果之间进行生存分析。结果对124例人前列腺癌成组匹配免疫组化染色发现，Elf5可使E-钙粘蛋白表达上调，而使N-钙粘蛋白表达下调，初步提示前列腺癌组织中Elf5可能抑制EMT的发生。Elf5在LNCaP细胞高表达，在22Rv1细胞低表达；在LN

7、CaP和22Rv1细胞中，Elf5与TGF-β对细胞形态影响呈负相关，沉默Elf5和/或用TGF-β处理可使细胞丧失极性，EMT标志物表达增加，从而使其具有更强的转移侵袭能力；且可以促进细胞的球形成能力和迁移能力，使其多向分化能力和恶性迁移能力增加。Elf5和TGF-β对EMT的作用呈负相关，Elf5可以抑制TGF-β驱动I天津医科大学博士学位论文的前列腺癌上皮间质转化。在HEK293、LNCaP和22Rv1中，Elf5均可以抑制C