tgf-β3通过上皮间质转化抑制放射性肺纤维化及其机制研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________TGF-β3通过上皮间质转化抑制放射性肺纤维化及其机制研究姓名：胡蝶学号：2111541046院系：公共卫生学院学位类型：专业学位专业：公共卫生专业研究方向：疾病预防控制导师：朱茂祥研究员论文提交日期：2018年5月26日论文答辩日期：2018年5月18日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文ThemechanismsofTGF-β3amelioratingradiation

2、-inducedpulmonaryfibrosisbyepithelial-mesenchymaltransitionCandidate：HuDieStudentID：2111541046Affiliation：SchoolofPublicHealthAcademicDegreeApliedfor：professionaldegreeofPublicHealthSpeciality：PublicHealthSupervisor：Prof.ZhuMaoxingAssistantSupervisor：Prof.YangZhi

3、huaDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文TGF-β3通过上皮间质转化抑制放射性肺纤维化及其机制研究摘要【目的】近年来，由于环境污染的加剧，胸部肿瘤的发病率呈逐年增加的趋势，放疗是目前临床上治疗胸部肿瘤的常规手段，然而，放射性肺纤维化是胸部放疗最严重的并发症之一，其发病率较高，目前尚缺乏特异有效的预防和治疗手段，患者预后较差，严重影响人类的健康。因此

4、，如何预防和减轻放射性肺纤维化的发生是医学工作者们致力追求的目标，目前，已有研究表明转化生长因子-β3（transforminggrowthfactor-β3，TGF-β3）具有抑制放射性肺纤维化的作用，但具体的作用机制还尚不清楚，很多文献报道，肺泡上皮细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，60EMT）是肺纤维化的重要原因之一，本研究通过COγ射线诱导小鼠和肺泡上皮细胞（Alveolarepithelialcells,AECs）建立放射性肺纤维化动物模型和肺泡上皮细胞（A

5、lveolarepithelialcells,AECs）EMT体系，探索TGF-β3是否经EMT途径抑制放射性肺纤维化及可能的具体信号转导机制。【方法】90只C57BL/6雌性小鼠按体重大小随机分成对照组、照射+生理盐水组（简称照射组）和照射+TGF-β3组（简称TGF-β3组），照射60组与TGF-β3组用照射剂量为20Gy的Coγ射线单次胸部照射，此后每周1次分别经腹腔注射0.5ml0.9%的生理盐水和TGF-β3(1μg/kg)，并分别于照射后的1个月、3个月和6个月活杀小鼠，用苏木素-伊红（HE）和Masson三

6、色染色法观察小鼠肺组织病理学的改变，用免疫组化检测小鼠肺组织中EMT相关的上皮标志物ZO-1与间质标志物N-cadherin的表达I广东药科大学硕士研究生学位论文60情况；C0γ射线照射肺泡上皮细胞建立辐射诱导的EMT细胞体系，照后给予TGF-β3和TGF-β1干预，利用流式和免疫印迹技术（WesternBlot）检测EMT相关蛋白上皮标志物E-cadherin与间质标志物N-cadherin的表达和TGF-β/smad通路相关蛋白P-smad3与smad3的表达；用逆转录聚合酶链式反应（Reversetranscrip

7、tionpolymerasechainreaction,RT-PCR）检测TGF-β1mRNA和TGF-β3mRNA的表达。【结果】HE和Masson染色结果显示，照射能够引起小鼠肺泡间隔明显增宽、肺泡壁增厚、肺泡结构严重破坏及胶原纤维的大量沉积等典型纤维化病理改变；并且TGF-β3组和照射组比较，小鼠肺组织病理改变明显减轻，胶原纤维沉积减少，说明我们已成功建立了小鼠放射性肺纤维化模型，TGF-β3对照射导致的放射性肺纤维化有明显的抑制作用；免疫组化结果显示，小鼠照射后1个月、3个月和6个月，肺组织中上皮特征标志物ZO-

8、1的表达量明显减少（P<0.05），间质特征标志物N-cadherin的表达量明显增高（P<0.05），表明EMT与放射性肺纤维化的发生发展密切相关；不过，TGF-β3组ZO-1和N-cadherin的表达量却介于对照组与照射组之间，与对照组和照射组比较均具有显著性差异（P<0.05）。说明TGF-β3对照射诱导的小