tgf-β1诱导人子宫颈腺癌hela细胞上皮间质转化的实验研究

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1、进划匡堂院亟±堂焦诠塞目录1TGF．pl诱导人子宫颈癌腺Hela细胞上皮问质转化的实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291．7结论

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯351．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯361．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯422致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯433上皮间质转化的分子机制及其在肿瘤中的作用(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44泸州医学院硕士学位论文TGF-p1诱导人子宫颈腺癌Hela细胞上皮间质转化的实验研究摘要㈣必目的：宫颈癌是女性妇科三大恶性肿瘤之一，宫颈腺癌是宫颈癌第二多见的组织学类型，

3、约占宫颈癌的10％，宫颈腺癌较宫颈鳞癌更易于发生转移，预后差。近年来研究发现上皮间质转化(Epithelial．MesenchymalTransitions，EMT)与肿瘤的发生发展有重要联系。转化生长因子B1(Transforminggrowthfactorbetal，TGF-91)已被证实是上皮间质转化的重要诱导剂，本实验拟通过体外培养人宫颈腺癌Hela细胞，在TGF．91诱导下体外构建Hela细胞上皮间质转化模型，研究其对Hela细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法：体外培养人宫颈腺癌He

4、la细胞，分为实验组：用不同浓度TGF一91(O．01、O．1、1、10ng／m1)刺激Hela细胞，对照组：用不含TGF．91的无血清培养基培养Hela细胞。①用不同浓度TGF—Bl(O．01、0．1、l、lOng／m1)刺激Hela细胞后于不同时间点观察其细胞形态变化；②不同浓度TGF一91刺激Hela细胞72h后，用半定量RT-PCR法检测上皮间质转化相关标记物E—cadherin及VimentinmRNA表达情况；③不同浓度TGF一131刺激Hela细胞后，细胞免疫组织化学方法检测E—c

5、adherin，Vimentin蛋白的表达变化；④用CCK8法检测不同浓度TGF．91刺激Hela细胞后对其增殖影响；⑤用流式细胞仪检测不同浓度TGF—p1刺激Hela细胞72h时对其凋亡的影响；⑥用lOng／mlTGF一131刺激Hela细胞后用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果：①倒置显微镜下观察到不同浓度TGF．pl刺激Hela细胞24h时与对照组相比形态未发生明显变化；泸州医学院硕士学位论文刺激48h时就开始出现变化，细胞伸出许多小突出，部分失去多边形或立方形形态变为梭形；刺激72h

6、后变化更明显，与对照组比较，实验组大部分细胞呈现明显的问质细胞形态，表现为细胞拉长呈梭形或纺锤形，细胞的间隙变宽，细胞与细胞之间的连接变得松散，细胞由铺路石样分布变为不规则的分布；@RT-PCR检测结果显示：TGF．131刺激后，Hela细胞的上皮标记物E—cadherinmRNA表达下调，间质标记物VimentinmRNA表达上调且均呈浓度依赖性，与对照组相比差异有统计学差异(P<0．05)；③细胞免疫组织化学结果显示：TGF．Bl刺激后，随着TGF．131浓度的增加E—cadherin蛋白的

7、表达逐渐降低，Vimentin蛋白的表达则逐渐升高，与对照组相比差异有统计学意义(P0．05)，48h和72h后对Hela细胞生长增殖起抑制作用，与对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)，且呈时间和浓度依赖性；⑤流式细胞仪检测结果显示：TGF．D1刺激人宫颈腺癌Hela细胞72h时，随着TGF．p1浓度的增加Hela细胞的凋亡率也逐渐增

8、加，与对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)；⑥10ng／mlTGF一131刺激Hela细胞后其迁移能力增强。结论：@TGF．p1可以诱导人宫颈腺癌Hela细胞发生上皮间质转化；②TGF一131对人宫颈腺癌Hela细胞的生长增殖起抑制作用并能诱导其发生凋亡；③TGF．131可增强子宫颈腺癌Hela细胞的迁移能力。迁移关键词：宫颈腺癌；TGF．131；上皮间质转化；细胞增殖；细胞凋亡；泸州医学院硕士学位论文ResearchonTGF-plInducedEpithelialtoMesenchym