tgfβ1诱导肺泡上皮细胞间质转化

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1、TGF-β1诱导肺泡上皮细胞间质转化作者：黄振杰,郑金旭,莫凯天,苏石芳作者单位：广西北海市人民医院呼吸科;江苏大学附属医院呼吸科;上海市第八人民医院消化科【摘要】目的：通过观察TGF-1诱导下A549细胞出现的细胞形态学和E-cad表达的变化，探讨上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)过程在肺纤维化发病机制中的作用。方法：体外培养A549细胞，以TGF-1进行干预，收集不同时段的细胞，应用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测TGF-1干预前后E-cad的mRNA表

2、达变化;倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;间接免疫荧光观察E-cad蛋白表达的变化。结果：倒置相差显微镜观察到TGF-1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形，形态如同肌纤维母细胞。间接免疫荧光显示A549细胞的E-cad表达(红色荧光染色)随时间延长逐渐减少。RT-PCR显示E-cad的mRNA表达下调(P0.05)。结论：TGF-1在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,肺泡上皮细胞间质转化是肺纤维化的重要发病机制之一。【关键词】转化生长因子1,A549细胞,上皮细胞间质转化,肺纤维化Abstract：ObjectiveBy

3、observingthecellularmorphologychangesandtheexpressionofE-cadafterA549cellsweretreatedwithtransforminggrowthfactor1(TGF-1)，toinvestigatetheroleofepithelial-mesenchymaltransition(EMT)inthepathogenesyofpulmonaryfibrosis.MethodA549cellsculturedinvitroweretreatedbyTGF-1,

4、thenharvestedatdifferenttimepointstoassaymRNAexpressionofE-cadbyreal-timePCR(RT-PCR)beforeandafterA549cellsbeingtreatedbyTGF-1.Cellularmorphologychangeswereobservedbyphase-contrastmicroscope.ProteinexpressionofE-cadbyindirectimmunofluorescence.ResultsAfterbeingtreat

5、edbyTGF-1，A549cellswereobservedbyinvertedphasecontrastmicroscopetoturnfrompebbleshapetofusiformshape，amyofibroblast-likemorphology.IndirectimmunofluorescenceshowedproteinexpressionofE-cadreducedastimewentby(redstain).ThemRNAexpressionofE-cadwasdown-regulatedinRT-PCR

6、(P0.05).ConclusionTGF-1inducedEMTofalveolarepithelialcellsinvitrosuggeststhatEMTofalveolarepithelialcellsmightbeoneoffundamentalmechanismsofpulmonaryfibrosis.KeyWords:TransforminggrowthfactorA549cells;Epithelial-mesenchymaltransition;Pulmonaryfibrosis特发性肺纤维化(IPF)是最常

7、见的肺间质疾病,也是肺间质纤维化的主要原因。多数肺间质疾病病因不明,其发病机制目前也未完全阐明。传统观点认为各种损伤因素损伤肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞，炎症细胞浸润，细胞因子失衡，肺实质损伤后继发肺间质细胞增殖过度修复导致纤维化。国外有文献报道IPF是一种涉及异常创伤愈合的功能紊乱，进行性的上皮损伤和(或)激活可能处于纤维形成和间质细胞增殖的核心位置，这种作用是不依赖于炎症的[1-2]。肺泡上皮细胞(AECs)不仅仅是作为发病的促动因素，它们本身就可以通过一个叫做上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchym

8、altransition，EMT)的过程获得间质细胞表型而作为成纤维细胞和肌纤维母细胞的重要来源。在这个新的模式中，肺泡上皮应该被看作纤维化的关键环节之一，它作为一个多能的干细胞具有相当的可塑性，能参与到交替的途径中：上皮再生修复正常的肺泡结构，凋亡，或者通过EMT形成纤维化