mir-429通过onecut2抑制tgf-β1诱导的结直肠癌细胞上皮—间质转化的机制研究

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1、万方数据中图分类号盟圣5：三UDC610博士学位论文学校代码!Q§蛩密级盟miR-429通过Onecut2抑制TGF．p1诱导的结直肠癌细胞上皮．间质转化的机制研究miR-429inhibitTGF—p1inducedepithelial—mesenchymaltransitionbyOnecut2incolorectalCanCer作者学科研究学院(指导姓名：孙英男专业：临床医学方向：内科学系、所)：湘雅三医院教师：沈守荣教授论文答辩日期兰趔：!：13答辩委员会主席中南大学湘雅三医院2013年05月学位论文原创性声明嬲万方数据本人郑重声明

2、，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：勘黝日期：如工月互日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位

3、论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：函!垄参日期：立立年』月盟日日期：幺竺2年土月旦日导师签名监导师签名!竺!堡日期：堡乒年』月4日万方数据本课题受如下基金资助：国家973计划(NO．2006CB910503)国家自然科学基金项目(NO．30770972)万方数据摘要：miR-429通过Onecut2抑制TGF-p1诱导的结直肠癌细胞上皮．间质转化的机制研究[研究背景]结直肠癌是世界范围内常见的消化道恶性肿瘤，多

4、阶段发病和多基因参与是结直肠癌发生发展的重要病理特征。随着基因组学和转录组学研究技术的不断发展，使得人们能够从整体水平探究结直肠癌不同临床进展阶段的编码RNA和非编码RNA的动态表达规律。本课题组前期曾经采用最新全基因组芯片和microRNA芯片，构建了结直肠癌不同临床进展阶段的动态差异基因表达谱和动态miRNA差异表达谱，进而构建了microRNA．基因功能网络。从所构建的网络中发现，miR-429位于网络的核心位置，是结直肠癌发生发展过程中的重要microRNA。因此，本研究在课题组前期工作的基础上，选择miR．429进一步证实其在结直

5、肠癌发生发展过程中的动态表达规律和其在结直肠癌中所发挥的分子生物学功能及其作用机制。[研究方法]本实验组首先采用实时荧光定量PCR的方法，检测了miR-429在结直肠癌细胞和18例结直肠癌组织以及配对的18例结直肠癌远端正常组织标本中的表达。其次收集了结直肠癌不同临床进展阶段的组织标本及病理资料，共85个临床样本(61例结直肠癌组织TNM分期I期ll例，II期18例，III期20例，IV期12例及24例正常对照组)进行实时荧光定量PCR检测分析，证实miR-429在结直肠癌不同临床进展阶段的动态表达模式。利用103例结直肠癌组织芯片采用原位

6、杂交的方法进一步检测了miR．429在结直肠癌不同临床进展阶段的动态表达变化。对组织芯片中103侈0结直肠癌患者随访统计资料，获得生存资料，经_Kaplan．Meier生存分析miR．429的表达对结直肠癌预后预测的影响。并从细胞和分子水平上检测了miR-429对结直肠癌细胞EMT相关生物学行为和细胞表型的影响。构建结直肠癌皮下移植瘤模型，研究miR-429对结直肠癌皮下移植瘤的影响。在此基础上，我们通过在线软件targetscan6。1预测发现，在Onecut2基因的3’UTR区含有两个与IIl万方数据miR-429的结合位点，深入探讨m

7、iR-429通过Onecut2对TGF．131诱导的结直肠癌细胞上皮．间质转化的影响及其作用机制，为初步阐明miR．429在结直肠癌侵袭转移中的作用机制，也为临床抗肿瘤分子靶向治疗提供更多的理论基础。[结果]1．miR．429在结直肠癌发生发展过程中呈动态变化的表达模式，并与患者预后密切相关。通过实时荧光定量PCR和原位杂交的方法检测了miR-429在结直肠癌不同临床进展阶段的表达，发现miR-429在绝大所数结直肠癌中表达明显下调，miR-429在不同临床进展阶段的结直肠癌中的表达呈动态变化的趋势，其变化趋势与本课题组前期通过miRNA芯

8、片获得结直肠癌的miRNA动态差异表达的模式一致。通过使用原位杂交的方法分析miR一429在103例结直肠癌中的表达与患者临床病理特征的相关性，发现miR-429在结直肠癌中的低