鸭rig-i在免疫调节中的作用及分子调控机制

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1、隣嘲六餐襄於＼觀了家桐教授，扬州大学，江苏扬州，２２５０献如＇ｊ馬？＇暮举仿级别／博壬学科专业名称巧：动物遗传育种与繁殖每；论文提交日期２０１５１５年５月２３曰：年５月论文答辩口期：２０嘴学化授予单位：扬州大学学化授予＾期；２０１５年６月３０日圓国家水禽产业技术体系专项－４３－０３）（ＣＡＲＳＥａｒｍａｒｋｅｄＦｕｎｄｆｏｒＭｏｄｅｍＷａｔｅｒｆｏｗｌＩｎｄｕｓｔｒｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｓｍｃｕｒｅｎｓｒ－－ｙｔｅＰｒｏｖｉｄｅｄｂｙｈ

2、ｉｎａＡｌｔｕＭｉｉｔＡＲＳ４３（ＢＣｇｒｉｙ（Ｃ）－江苏省优势学科（２０１１１３７）ＰｒｉｏｒｉｔｙＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｏｒａｍＤｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆＪｉａｎｓｕＨｉｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎｇｐｇｇｎｓｔ－Ｉｉｔｕｔｉｏｎｓ２０１１１３７（）扬州大学优秀博±学位论文基金ＥｘｃｅｌｌｅｎｔＰｈＤＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ陈化Ｒ－１ＩＧＩ在免疫调节中的作用及分子调控机制鸭Ｒ

3、ＩＧ－Ｉ在免疫调节中的作用及分子调控机制中文摘要近年来一，禽流感特别是高致病性禽流感给养禽业带来毁灭性的打击，并引发系列的公共卫生安全问题。鸡、鸭同为家禽，对流感病毒有着不同的敏感性，送与宿主本身抗性基因和免疫相关基因的表达调控存在着密切的关系。维甲酸诱导基因Ｉ（Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｄｕ化ｎ－ｉｎｅｌｅｅｅＩ，ＲＩＧＩ）能识别流感病毒并触发先天性免疫，该基因在鸡基因组上缺失，ｇ鸭基因组中保留，这种缺失使得鸡与其他禽类相比对禽流感病毒更易感、临床症状更明显。－但到

4、目前为止，鸭民ＩＧＩ是如何发挥抗病奉作用尚不清楚。本实验尝试从不同角度阐释鸭Ｒ－Ｉ在ＩＧ免疫调节中的作用及分子调控机制，旨在揭示一ｄｕＲＩＧ－Ｉ在抗病毒先天性免疫信号传递途径及其代偿机制，并期进步完善鸡体内抗病毒先天性免疫途径及禽类免疫系统相关的基础研究。主要研究内容如下：－－１．ｄｕＲＩＧＩｄｕＲＩＧＩ为探讨基因的功能，首先克隆获得了ｃＤＮＡ序列，提交ＧｅｎＢａｎｋ＇（登９４６３２３．２和ＫＣ８６９６６０．１），发现了３ＵＴＲ存在可变剪接体录号为ＪＱ；间接免疫巧光方一－法

5、检测结果显示ｄｕＲＩＧＩ蛋白主要位于细胞质，其次位于细胞核，进步证实了该蛋白为－ＰＣＲｄｕＲＧ－Ｉ胞质受体；半定量ＲＴ检测结果显示Ｉ在必、肝、肾、腺胃、大肠、小肠、肌肉、胸腺和下丘脑等组织的本底表达均处于较低水平，仅在脾脏和肺脏组织中有少量表达；一进步采用ｐｏｌｙ［Ｉ：Ｃ］模拟病毒感染，实时定量ＰＣＲ检测感染９６ｈ内的脾脏和肝脏中的ｄｕＲＩＧ－ｍＲＮＡ－Ｉ基因的动态表达变化，发现感染８ｈ后脾脏和肝脏中ｄｕＲＩＧＩ基因表达量？＜０均显著上升（／．０５）。－２ｄｕＲＩＧＩ基因呈

6、－。．基于上述诱导性表达的特点，我们开展了ｄｕＲＩＧＩ表达调控研究一ｄｕＲＩＧ－Ｉ启动子区Ｃ首先克隆了，在线预测发现该基因启动子区存在个明显的ｐＧ岛，但一ＢＳＰ进－步检测结果显示，脾脏等中ＲＩＧＩ启动子区的ＣｐＧ岛处于非甲基化状态。双巧光？ｕＲＩＧ－Ｉ＋１４－３０素酶报告基因系统检测ｄ基因启动子转录活性结果显示，在１ｂｐ存在正调。控，该区的转录因子结合位点预测结果表明，ＩＲＦ１等反式作用因子可能起着重要作用３ｄｕＲＩＧ－ｄｕＲ－ｄｕＲ－．为了证实Ｉ的激活机制，对ＩＧＩ进行保守

7、结构域预测ＩＧＩ，发现基因具有ＲＬＲｓ家族的典型特征（包括ＣＡＲＤ结构域、ＲＮＡ解旋酶等功能结构域），据此构－建了不同结构域缺失突变体的表达载体，经ＲＴＰＣＲ、间接免疫茨光和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法鉴－－定重组质粒的表达，利用ＲＴＰＣＲ检测结果发现ＣＡＲＤ结构域能介导ＲＬＲ通路上Ｎ、ｑＩＦＰ一Ｍｘ进－ｋＢ荣光素酶报告系统和ＥＬ投Ａ检测ｌ及ＰＫＲ基因的表达显著上调；步采用ＮＦｏ－－ｐｌｙ［Ｉ：Ｃ介导的ＩＦＮＰ的表达量，结果发现经ｏｌＩ：Ｃ］诱导，ｄｕＲＩＧＩ被显著激祗同时］ｐ

8、ｙ［ＣＡＲＤＳ结构域ＮＦ－ｋＢ促使ＩＦＮ－的产生能够通过激活Ｐ。ｎ扬州大学博壬学位论文一４ｄｕＲＩＧ－Ｉ－Ｉ．为进步探索基因在抗病毒先天性免疫中的作用，慢病毒介导的ｄｕＲＩＧ－－－－－基因在ＤＦ１细胞中持续稳定高表达，获得了稳转细胞株ＤＦ１／ＬＶ５ＲＩＧＩ和ＤＦ１／ＬＶ５，并－ＰＣＲ及Ｗｅｓ－用ＲＴｔｅｒｎＢｌｏｔ验证ｄｕＲＩＧＩ基因ｍＲＮＡ水平和蛋白水平的表达情况，为一下步研究提供了细胞模型。ｄｕＲＩＧ－５．为探索Ｉ在抗病