调节软骨细胞骨架蛋白对成软骨表型的影响

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1、硕士学位论文调节软骨细胞骨架蛋白对成软骨表型的影响学科专业外科学学位类型科学学位□专业学位研究生姓名宋雄波导师姓名、职称刘宝荣教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月1分类号密级学校代码10542学号201202201515调节软骨细胞骨架蛋白对成软骨表型的影响Effectsofcytoskeletonmodulationonthephenotypeofchondrocytes研究生姓名宋雄波指导教师姓名、职称刘宝荣教授学科专业外科学研究方向软骨细胞力学、生物学湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月1湖南师范大学学位论文

2、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引巧的内容外，本论文不含任何其他个人或集体氏经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中化明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签違：２５：年ｒ月曰湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研究生在校攻读学位撕间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学．同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印

3、件和电子販，允许论文被查阀和借阅。本人授权湖南师范大学可Ｌ乂将本学位论文巧全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｌ义采用影印、集巧或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＇＇＇＾ｉ作者签名：％曰期：乃年月曰导师签名：言日曰句期：＞月去＾＾年少嗦＾摘要目的通过调节软骨细胞骨架蛋白结构，分析软骨细胞成软骨细胞表型是否发生改变，探讨软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系。方法体外分离、二维培养新西兰兔软骨细胞，待细胞达到一定数量后，采用三维微团培养法培养软骨细胞2周，随机将软骨细胞分为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B

4、组及丙烯酰胺组，通过加入秋水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝，继续培养1周、3周，从大体形态、组织切片HE染色、阿尔新蓝染色、免疫组化染色分析成软骨细胞表型的改变。结果1.软骨细胞行三维微团培养2周后，可形成肉眼明显可见的细胞微团组织，呈扁椭圆形，色白，质软，弹性可；2.不同药物处理1周，质量上发现对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比无明显差异（4.970.0963，4.76780.2997，4.840.3246；P>0.05），与丙烯酰胺组相比有较大差异（4.970.0963,2.8

5、1330.2444；P<0.05）；3周时，对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组在质量上无明显差异（8.84440.7012,8.47890.6473,8.46330.6837,8.07670.2779；P>0.05）；3.HE染色显示，不同药物处理1周时，对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组细胞较密集、均一，丙烯酰胺组细胞较少、分散；3I周时，对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组软骨细胞形成类软骨陷窝现象，细胞分布均一；4.阿尔新蓝染色发现，不同药物处理1周时，对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比糖胺聚糖表达较多，各

6、组无明显差异（0.60120.0672，0.56570.0514，0.56860.0568；P>0.05），与丙烯酰胺组相比有较大差异（0.60120.0672，0.15170.0484；P<0.05）；3周时，对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组糖胺聚糖均为高表达，各组间无明显差异（1.69470.4163,1.54160.3437,1.78840.2861,1.73820.3107；P>0.05）；5.免疫组化染色显示，药物处理1周时，对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比COLⅡ（0.08940.0054，0.0

7、8590.0024，0.08290.0066）表达多，COLⅠ（0.00130.0002，0.00170.0002，0.00160.0056）表达少，各组间无明显差异（P>0.05）；与丙烯酰胺组相比COLⅡ（0.08940.0054，0.02890.0099）、COLⅠ（0.00130.0002，0.10710.0012）表达有较大差异(P<0.05)；3周时，对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组COLⅡ（0.19040.0471，0.19040.0471，0.18560.0224，0.17720.0353）表

8、达多，COLⅠ（0.06750.0056,0.06930.0079,0.07220.0051,0.07460.01