葫芦素e通过pi3kaktnf-κb信号通路抑制tnf-α诱导的mh7a细胞炎症因子的分泌

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1、分类号：单位代码：１０４４１密级：：２０学号１２０２４６６隊？山系中屋壯＃、銳招硕±能义－－２＾葫芦素Ｅ通过Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ／ＮＦＫ目信号＾中文题目：通路抑制ＴＮＦ－Ｑ诱导的ＭＨ７Ａ＼细胞炎症因子的分泌Ｃｕｃｕｒｂ－ａ－英文题目ｉｔａｃｉｎＥｉｎｈ化ｉｔｓＴＮＦｉｎｄｕｃｅｄｉｎ扫ａｍｍａｔｏｒｙ：ｃｔｏｋｉｎｅｒｏ加ｃｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｓｎｏｖｉｏｔｅＭＨ７Ａｙｐｙ巧－ｃｅｌｌｓｖｉａｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ＮＦ证ａｔｈｗａｐｙ一ｊ＾Ｂｈｉ申请人姓名齡运

2、入学年月２０１２年９月学科专业中医骨伤料学指导教师徐展望学位类型医学科学学位２０１５年５月１０曰原创性声明本人郑重声明；所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立完成的。，文中陈注明引用的内容外，不包含任何其他已经发表的科研成果对本文研究做出重要贡献者，均已在文中Ｗ明确方式表明。本声明的法律责任完全由自己承担。ｊ占论义作者豁名１导师雜名田期＾＞＾关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同被意查学校保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许部分阅和借

3、阅。本人授权山东中医药大学可将本学位论文的全部或手段保内存容和编汇入有编本关学数位据论库进文巧。检索，可采用影印、缩印或其他复印论（保也密论文在解密后应遵守此规定）作者铅名导师雜名Ｈｍ提要目的：本实验研究葫芦素E(CuE)，能否抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7Acell)炎症因子的分泌，并探究其抗炎疗效及作用机理。方法：1.MH7A细胞系使用含10%胎牛血清的1640完全培养基于37℃、5%CO2、100%的恒温培养箱中培养。2.CuE对MH7A细胞系的细胞毒性实验(CCK-8)。3.CuE对TNF-α诱导的

4、MH7A细胞系炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8)生成的作用(RT-PCR)。4.CuE对TNF-α诱导的MH7A细胞系炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8)生成的作用(ELISA)。5.CuE对TNF-α诱导的MH7A细胞系PI3K/Akt/NF-κB信号通路(PI3K-p85、p-Akt、NF-κBp-p65、p-IκB、p-IKK)的影响(Western-blot)。6.CuE对TNF-α诱导的MH7A细胞系NF-κBp65核转位的作用(Confocal)。结果：CuE在10nmol/L浓度以下对MH7A细胞系无明显的细胞毒性；CuE可以抑制TNF-α诱

5、导的MH7A细胞系炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8)mRNA和蛋白水平的生成，可以抑制NF-κB信号通路中p-p65、p-IκB、p-IKK的表达以及NF-κBp65的核转位，同时可以像PI3K抑制剂(LY294002)一样抑制PI3K/Akt的表达以及炎症因子基因和蛋白水平的生成。结论：实验数据表明，CuE可以通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路来抑制TNF-α诱导的MH7A细胞系炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8)的生成，从而发挥抗炎作用。CuE可以作为治疗类风湿性关节炎的潜力药物应用于临床。关键词CuE；炎症因子；PI3K/Akt，NF-

6、κB；类风湿性关节炎CucurbitacinEinhibitsTNF-α-inducedinflammatorycytokineproductioninhumansynoviocyteMH7AcellsviamodulationofPI3K/Akt/NF-κBpathwaySpecialty:OrthopedicsofTCMAuthor:JiaQingyunTutor:Prof.XuZhanwangAbstractObjective:IncreasingstudiesindicatethatCucurbitacinE(CuE),aderivativeisolatedfr

7、omCucurbitaceaeplantsmayexertanti-inflammatoryeffect.InthisstudyweexploretheeffectofCuEonTNF-α-inducedinflammatorycytokinesproductioninhumansynoviocyteMH7Acells,andfurtherexplorethedetailedmolecularmechanisminvolvedinitsanti-inflammatoryeffect.Methods:1.MH7Acelllineswerec