巨噬细胞移动抑制因子通过PI3KAkt信号通路抑制人宫颈癌细胞凋亡的初步分析

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1、-山西医科大学硕士学位论文摘要目的：研究MIF对宫颈癌细胞凋亡的作用，及其可能通过PI3K信号通路调节相关因子的表达，从而了解宫颈癌的发生发展的机制，为宫颈癌的诊治提供理论依据，为宫颈癌的治疗提供有效的途径。方法：首先，采用免疫细胞化学和WesternBlotting检测宫颈癌细胞株中MIF、PI3K、pAkt及凋亡相关基因p53和Bcl-2蛋白的表达情况；其次，采用MTT、流式细胞术检测rhMIF刺激后人宫颈癌株的增殖和凋亡情况，并寻找rhMIF的最适刺激浓度及最佳时间，然后使用免疫细胞化学和WesternBlotting检测宫颈癌细胞株中PI3K、pA

2、kt、p53和Bcl-2蛋白的表达情况；最后用MTT、流式细胞术检测rhMIF与PI3K抑制剂LY294002次序作用后细胞的凋亡率。结果：宫颈癌细胞株中均有MIF的表达，且在肠转移的CaSki细胞中表达更高，表明MIF的表达可能与细胞的恶性潜能有关；rhMIF刺激后能显著促进宫颈癌细胞的增殖，抑制其凋亡，作用呈时间-剂量依赖性；两种细胞中PI3K、pAkt、p53和Bcl-2蛋白表达均较未刺激前明显增高，刺激后的Siha细胞中因子的表达高于未受刺激的肠转移细胞CaSki。PI3K抑制剂LY294002能显著抑制细胞的增殖，作用呈时间-剂量依赖性。LY29

3、4002能显著抑制宫颈癌细胞中PI3K、pAkt、p53、Bcl-2的蛋白表达。经外源性MIF和PI3K抑制剂LY294002共同干预后，宫颈癌细胞的增殖明显受抑，凋亡率升高，表明PI3K抑制剂LY294002能显著抑制MIF调节细胞的增殖和凋亡的能力提示MIF可能是通过PI3K/Akt信号通路来发挥诱导细胞凋亡的作用。结论：宫颈癌细胞株中存在MIF的表达，且在有转移的细胞中表达更明显，表明MIF的表达可能与细胞的恶性潜能有关。宫颈癌细胞株中存在PI3K、pAkt、p53、Bcl-2高表达，且与MIF的表达呈正相关，推测可能与宫颈癌细胞的凋亡抑制有关；外源

4、性rhMIF促进宫颈癌细胞增殖，抑制其凋亡，促进PI3K、pAkt、p53、Bcl-2在宫颈癌中的表达，从而促进宫颈癌细胞的增殖；使用PI3K抑制剂后，宫颈癌细胞的凋亡率显著升高，提示MIF可能通过PI3K/Akt信号转导通路调节抑制宫颈癌细胞的凋亡，维持细胞的存活。本实验研究MIF在宫颈癌增殖、凋亡中可能的作用机制，将有助于进一步了解宫颈癌的发生与发展，为阐明宫颈癌的发病机制提供线索。关键词：宫颈癌细胞；细胞凋亡；MIF；PI3K；pAkt；p53；Bcl-2---I---山西医科大学硕士学位论文Macrophagemigrationinhibitory

5、factorregulatingapoptosisofcericalcancercellsviaPI3KpathwayAbstructPurpose:ToinvestigatetheeffectsofMIFonapoptosisofhunmancericalcancercellsandexpressionofPI3K，p53andBcl-2inthem，andfurtherdeterminewhethertheeffectsarerelatedtothePI3K/Aktsignaltransductionpathway.Ourresearchistostu

6、dythepossiblemechanismofapoptosisbyMIF-mediated，provideapossibleeffectivenewclinicalwayforthetherapyofcervicalcancer.Methods:CervicalcancerCaSkiandSihacellswereculturedandthentreatedwith100μg/LrecombinanthumanMIF(rhMIF)withandwithoutaPI3Kinhibitor,LY294002(25μmol/L).MTTassayandFlo

7、wCytometrywasusedtodetecttheproliferationandapoptosisofcervicalcancerCaSkiandSihacells;WesternBlottingdetectionandimmunocytochemistrywasusedtodetecttheproteinexpressionofPI3K,pAkt,p53andBcl-2.Results:WesternblottingandimmunocytochemistryshowedthattheprotainexpressofMIFintheCaSkian

8、dSihacellsandmorehigerintheCaSkic