沉默aurora-b通过pi3kaktnf-κb信号通路抑制骨肉瘤细胞侵袭和迁移的体外研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：406521212485南昌大学硕士研究生学位论文沉默Aurora-B通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制骨肉瘤细胞侵袭和迁移的体外研究KnockdownofAurora-BinhibitsosteosarcomacellinvasionandmigrationviamodulatingPI3K/Akt/NF-κBsignalingpathway朱粮博培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：舒勇主任医师教授博士生导师刘志礼副主任医师副教授硕士生导师申请学位的学科门类：医学学科专业名称：外科学（骨科）论文答辩日期：国家自然科学基金项目资

2、助（No.81260400）江西省教育厅科学基金项目资助（No.GJJ12097）江西省自然科学基金项目资助（No.20142BAB205056）答辩委员会主席：评阅人：年月日I学位论文独创性声明一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本

3、学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日沉默Aurora-B通过

4、PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制骨肉瘤细胞侵袭和论文题目迁移的体外研究姓名朱粮博学号406521212485论文级别博士□硕士院/系/所研究生院医学部专业外科学（骨外）E_mail备注：公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的:本研究旨在体外探讨沉默Aurora-B基因表达通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路对人骨肉瘤细胞的侵袭和迁移的影响。方法：构建干扰Aurora-B基因表达的慢病毒载分别命名为LV-shAURKB（LV-shAURKB-1、LV-shAURKB-2、LV-shAURKB-3）和阴性对照载体LV-NC。分别转染人骨肉瘤细胞株

5、U2-OS细胞和HOS细胞。qRT-PCR检测Aurora-B基因的mRNA水平。Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测U2-OS细胞和HOS细胞侵袭和迁移情况。采用免疫组化方法研究24例伴有肺转移的骨肉瘤标本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）蛋白的表达情况，并分析它们的相关性。WesternBlot检测转染LV-shAURKB后Aurora-B、p-Akt（Ser473）、Akt、p-PI3K(Tyr199)、PI3K、NF-κB（p65）、β-actin蛋白表达水平。结果：①qRT-PCR和WesternBlot实验结果显示与对经转染阴照载体组对比，转染了LV-shA

6、URKB组骨肉瘤细胞的Aurora-B的mRNA和蛋白水平明显降低；②Transwell侵袭和划痕愈合实验结果显示，抑制Aurora-B蛋白表达后，骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力明显减弱。③24例肺转移的骨肉瘤标本免疫组化结果显示，Aurora-B和p-Akt(Ser473)蛋白表达水平正相关（R=0.726,P=0.02）；④WesternBlot实验结果显示沉默Aurora-B蛋白表达后，p-Akt（Ser473）、p-PI3K(Tyr199)、PI3K、NF-κB（p65）蛋白表达水平明显降低，而Akt蛋白表达无明显变化；II摘要结论：我们的研究表明，在体外沉默Aurora-B可以部分通

7、过抑制“PI3K/Akt/NF-κB”信号通路抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移。Aurora-B有望成为临床骨肉瘤治疗的分子靶点。关键词：骨肉瘤；Aurora-B；侵袭和迁移；PI3K/Akt/NF-κB信号通路IIIAbstractABSTRACTObjective:ToinvestigatetheinhibitoryeffectofAurora-BoninvasionandmigrationofOScellsandthea