精原干细胞动态标记物的初步筛选

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1、宁夏医科大学硕士学位论文摘要分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：201200209宁夏医科大学硕士研究生学位论文精原干细胞动态标记物的初步筛选Screeningofdevelopmentalmarkersinspermatagonialstemcells学位申请人：田稼指导教师：马良宏申请学位类别：医学专业领域名称：外科学研究方向：精原干细胞的应用基础研究所在学院：临床医学院论文完成日期：二〇一五年三月宁夏医科大学研究生院I宁夏医科大学硕士学位论文摘要NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationof

2、Master’sDegreeScreeningofdevelopmentalmarkersinspermatagonialstemcellsStudent’sName:TianjiaSupervisor：MalianghongSubjectCategory:MedicalScienceMajor:SurgerySpecialty:UrinarysurgerySchool:ClinicalMedicineSchoolCompletionDate:Mar.2015II宁夏医科大学硕士学位论文摘要精原干细胞动态标记物的初步筛选III宁夏医科大学硕士学位论文摘要

3、摘要精原干细胞移植对男性不育的治疗具有潜在的临床应用价值，尤其对青春期前接受大剂量化疗致生精功能严重受损的非梗阻性无精子症患者，具有独特的临床应用价值。只要在非梗阻性无精子症患者睾丸内找到精原干细胞，就有可能促使其增殖分化获得精子；或通过特异性标志物分选，体外获得纯度较高的精原干细胞用于增殖培养或移植。然而，如何确定所获得细胞是精原干细胞，成为此项工作的首要条件。精原干细胞在增殖和分化的过程中细胞表面和细胞内会表达许多蛋白质，这些蛋白质如果有较好的特异性和敏感性，作为精原干细胞标志物，将对分离及鉴定精原干细胞发挥重要作用。我们将不同年龄阶段小鼠精原干细胞

4、采用复合酶消化、免疫磁珠分选技术分离纯化出后，通过双向凝胶电泳及蛋白质质谱分析技术动态观测各年龄阶段精原干细胞蛋白质表达的差异，运用生物信息学蛋白质组数据库筛选并确定差异性蛋白质或发现新的蛋白质。目的：利用iTRAQ蛋白质质谱分析技术观测各年龄阶段精原干细胞（SSCs）蛋白的表达，进一步分析SSCs标志物表达的动态变化，运用生物信息学蛋白质组数据库筛选并发现新的标志物。方法：以健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象，按照年龄段不同分为8组，无菌提取各组小鼠睾丸组织，采用复合酶消化、免疫磁珠分选的方法纯化SSCs后提取蛋白，利用双向电泳及iTRAQ标记蛋白质

5、质谱分析技术并结合蛋白质数据库对各组蛋白质进行分析鉴定。结果：质谱实验共得到谱图248510张，通过Mascot软件进行分析，共鉴定到1132种蛋白。以蛋白丰度差异倍数达到1.2倍以上，且经统计学检验P0.05视为存在差异性蛋白,8组共检测到差异蛋白298种。鉴定到目前已知的SSCs标志物9种（PCNA、GFRA1、CDH1、AnnexinA7、UCHL1、VASA、CD49f、CD29、PLZf），通过各组对比获得在不同年龄段内表达变化趋势，其中GFRA1、CD49f、CD29在SSCs中的变化IV宁夏医科大学硕士学位论文摘要趋势与以往文献一致，并筛

6、选出10种蛋白质（P63、CD71、CD98、K19、ACE、K18、K15、K17、SH2、SH3）作为SSCs标志物进一步研究的对象。结论：SSCs内的蛋白随着机体年龄的变化表达存在差异，iTRAQ蛋白质质谱分析技术可以对SSCs蛋白质组学信息进行分析与比较，获得各年龄阶段差异性表达蛋白，为进一步分析和研究这些差异性蛋白的功能与作用提供了新的方法。关键词：精原干细胞，蛋白质组学，生物标记物，同位素标记相对和绝对定量技术ScreeningofdevelopmentalmarkersinspermatagonialstemV宁夏医科大学硕士学位论文摘要c

7、ellsAbstractSpermatogonialstemcellstransplantationhasapotentialclinicalvalueforthetreatmentofmaleinfertility.Especiallyforthosenon-obstructiveazoospermiapatientswithseverelyimpairedspermatogenesis,whichiscausedbyreceivinghigh-doseofchemotherapybeforepuberty,thistechniqueisassocia

8、tedwithauniqueclinicalvalue.Itispossible