硼替佐米对人骨髓增生异常综合征的治疗作用以及耐药机制的研究

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1、及nASOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文2015年4月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：各日期：“苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作

2、权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论:论玄作者签名：日期：邮硼替佐米对人骨髓增生异常综合征的治疗作用以及耐药机制的研究中文摘要中文摘要目的：本课题主要是研究化

3、疗药物硼替佐米对人骨髓增生异常综合症（MDS）细胞株SKM-1的作用，并探讨SKM-1细胞对硼替佐米产生耐药的信号调控机制。方法：（1）用流式细胞术检测硼替佐米对SKM-1细胞凋亡和周期的影响；（2）用免疫印迹法和免疫荧光法检测硼替佐米对SKM-1细胞周期及凋亡影响的作用机制；（3）用硼替佐米间断冲击SKM-1细胞，建立耐药细胞株SKM-1R.（4）用流式细胞术，MTT，以及蛋白免疫印迹等方法检测SKM-1R的耐药发生机制;（5）用SKM-1细胞皮下接种4周大Nod/SCID小鼠，建立人SKM-1细胞肿瘤模型。结果：硼替佐米处理SKM

4、-1细胞24小时后，通过上调周期调控蛋白Wee1，将细胞周期阻滞在G2/M期，同时通过上调cleavedcaspase-3蛋白、下调p-ERK蛋白诱导细胞凋亡；自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达明显上调，表明其可能发生自噬；硼替佐米处理耐药细胞株SKM-1R24小时后，并未诱导细胞凋亡，细胞活力并未降低，但总的ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达均上调；自噬标志蛋白LC3Ⅱ蛋白表达无明显变化，表明其并未发生自噬；此外，MEK/ERK抑制剂（U0126和D98059）可以克服SKM-1R的耐药性。体内实验结果显示，硼替佐米可明显抑制小鼠人SKM

5、-1细胞肿瘤生长，并可延长小鼠生存期，这与我们体外细胞实验结果是一致的。结论：本实验研究结果表明，硼替佐米可抑制SKM-1细胞周期，并诱导SKM-1细胞产生凋亡、自噬；在体内，硼替佐米可明显抑制小鼠人SKM-1细胞肿瘤生长，并延长小鼠存活期。硼替佐米对SKM-1细胞的作用一定程度上与MEK/ERK信号通路有关，且MEK/ERK信号通路在SKM-1对硼替佐米耐药的发生过程中也起到了重要的作用。我们的研究结果还显示，MEK/ERK通路抑制剂可使SKM-1细胞耐药性消失。所以在本研究中，我们认为MEK/ERK通路抑制剂联合硼替佐米可作为治疗

6、MDS的一种补充疗法。关键词：SKM-1；硼替佐米；p-ERK；耐受性细胞株SKM-1R；MEK/ERK抑制剂（U0126/D98059）作者：岳影星指导老师：宋耀华IAbstractTheeffectsofBortezomibonMyelodysplasticSyndromeanditsDrug-resistanceInvestigationTheeffectsofBortezomibonMyelodysplasticSyndromeanditsDrug-resistanceInvestigationAbstractObjectiv

7、e:OurstudyaimstoexploretheeffectsofBTZ(bortezomib)onmyelodysplasticsyndrome(MDS)celllineSKM-1,andtoinvestigatethemechanismofitsdrugresistance.Methods:(1)Cellapoptosisandcellcyclewereperformedbyflowcytometry.(2)ThemechanismofBTZonSKM-1cellapoptosisandcellcyclewereassesse

8、dbyWesternblotandimmunofluorescence.(3)TreatSKM-1cellswithBTZintermittentlytoestablishtheBTZ-resisitantcelllin