玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞诱导的神经干细胞对糖尿病大鼠血视网膜屏障保护作用的实验研究

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1、分类号：R-77学校代码：10062密级：学号：2012602581硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞诱导的神经干细胞对糖尿病大鼠血视网膜屏障保护作用的实验研究TITLEExperimentalstudyontheprotectiveeffectofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsinducedneuralstemcellsintravitreouslyonblood-retinalbarrierindiabeticrats一级学科：临床医学二级学科：

2、眼科学论文作者：董蒙指导教师：陈松教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R-77学校代码：10062密级：学号：2012602581学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞诱导的神经干细胞对糖尿病大鼠血视网膜屏障保护作用的实验研究TITLEExperimentalstudyontheprotectiveeffectofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsinducedneuralstemcellsintravi

3、treouslyonblood-retinalbarrierindiabeticrats一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者：董蒙指导教师：陈松教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关

4、保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的建立Sprague-Dawley（SD）大鼠糖尿病模型，通过伊文思蓝（evansblue，EB）灌注大鼠视网膜后在磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline，PBS）中制作

5、透明视网膜标本，直接在普通荧光显微镜下观察早期糖尿病视网膜病变（diabeticretinopathy，DR）血视网膜屏障（blood-retinalbarrier，BRB）功能的改变；通过玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUCMSCs）诱导的神经干细胞（neuralstemcells，NSCs），观察其对DR大鼠BRB的影响。方法（1）40只雄性SD大鼠随机分为正常对照（CON）组10只大鼠和糖尿病组30只大鼠。腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立

6、糖尿病模型，根据病程，将糖尿病组大鼠分为糖尿病1个月（DM-1m）组、糖尿病3个月（DM-3m）组及糖尿病6个月（DM-6m）组；CON组大鼠腹腔注射等容量枸橼酸缓冲液。于各相应时间点经股静脉按45mg/kg注射30g/L的EB溶液，循环15min后摘除双侧眼球，立即置于PBS中完整剥离视网膜，放射状切开并平铺于载玻片上，避光晾至完全透明，封片，置于荧光显微镜下观察并拍照。应用IPP6.0软件分析图像，测量并比较EB渗漏区面积与视网膜面积的百分比。（2）60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、DR模型对照组及NSCs治疗组，其中正常对照组12只大鼠，DR

7、模型对照组及NSCs治疗组各24只大鼠。DR模型对照组和NSCs治疗组大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型。于糖尿病成模后3个月，NSCs治疗4组大鼠右眼玻璃体腔注射2μlNSCs悬液（2×10/μl）；DR模型对照组大鼠右眼注射等容量PBS；上述两组大鼠左眼及正常对照组大鼠双眼不给予任何干预。干预1个月后，采用EB灌注血管视网膜铺片观察视网膜血管形态及渗漏情况；EB定量检测BRB破坏情况；病理学切片观察视网膜组织改变情况。结果（1）糖尿病组大鼠较CON组血糖明显升高，体重明显下降（均P＜0.05）。CON组大鼠视网膜血管形态和走形正常，红色荧光均匀充盈于

8、血管腔。糖尿病成模1个月时，大鼠视网膜背景荧光较CON组略有增强；3个月时，背景荧光进一步增强