糖尿病大鼠玻璃体腔移植不同浓度人脐带间充质干细胞的实验研究

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1、分类号：R77密级：学位类别：科学学位团专业学位口学校代码：1062学号：2010602823学科门类：医学又肄眚科文垮硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：糖尿病大鼠玻璃体腔移植不同浓度人脐带间充质干细胞的实验研究TITLEEf代ctofdif．ferentconcentrationofhumanumbilicalmesenchymalstemcellstransplantedintovitreouscavityofdiabeticrat一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者：郑丹指导教师：陈松教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明0IIIIII

2、IIIIIIIllIIIIIIIIIIIIIIY2397144本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据

3、库。本论文属于保密口，在——年解密后适用本授权书。不保密函。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：日期：≯侈年b,42．日日期：≯叫；年‘A3日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的观察玻璃体腔移植不同浓度人脐带问充质干细胞(humanumbilicalmesenchymalstemcells，hUCMSCs)后糖尿病(diabetesmellitus，DM)大鼠视网膜功能变化及视网膜神经生长因子(nervegrowthfactor，NGF)的表达情况，观察比较移植不同浓度hUCMSCs对糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy，DR)治疗的疗效差异，进一步证

4、明治疗DR的最佳hUCMSCs浓度，探讨hUCMSCs治疗DR的可能机制。方法健康成年雄性SD大鼠48只，随机分成正常对照组(A组)和DM组，分别为10、38只。链脲佐菌素(streptozocin，STZ)尾静脉注射制作SD大鼠DR模型。将DM组大鼠随机分为DR组(B组)、玻璃体腔注射高浓度(1+10^6～7)hUCMSCs2pL组(C组)，玻璃体腔注射低浓度(1牢10^5～6)hUCMSCs2pL组(D组)，玻璃体腔注射安慰剂2pL组(E组)。正常对照组(A组，10只)和B组无处理。成模后每2-4w进行血糖监测。用溴化乙锭(Evansblue，EB)染色视网膜铺片，荧光显微镜观察视网膜血管

5、的变化情况：苏木精．伊红(HE)染色，光学显微镜下观察视网膜形态学变化；免疫组织化学法观察视网膜NGF阳性染色的情况，Image．ProPlus6．0图像处理分析软件分析各组染色区的平均累积光密度(integratedopticdensity，IOD)；用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测视网膜中NGFmRNA的相对表达量。采用SPSSl7．0统计软件，组问数据比较采用独立样本t检验、译因素方差分析、LSD—t检验进行统计学分析，P<0．05为差异具有统计学意义。结果1．血糖水平监测：STZ尾静脉注射一周后，测得正常对照组大鼠平均血糖值为(5．434-0．81)mmol／L，糖尿病组大鼠血

6、糖值为(27．594-3．56)mmol／L。在不同时间点测得DM大鼠血糖水平较高，但基本保持在一个稳定水平；与同期正常对照组大鼠相比差异均有统计学意义(P均<0．01)。2．体质量监测：大鼠造模成功时体质量于正常对照组大鼠相似，二者比较差异无统计学意义(t=0．805，P=0．433)。造模成功后正常对照组大鼠随着周龄的增加体质量增长较快，DM大鼠体质量增长速度较正常对照组减缓，周龄越长，天津医科大学硕士学位论文体质量相差越大，不同时间点测得两组体质量差异均有统计学意义(P均

7、可见，未见视网膜微血管瘤和视网膜新生血管形成。DM大鼠视网膜血管走形迂曲、扩张，视网膜上可见微动脉瘤，血管呈串珠样改变，血管周围可见高荧光渗漏及周边视网膜可见大片无灌注区。4．HE染色：A组正常大鼠视网膜各层结构整齐分明，细胞形态基本正常。内界膜完整清晰；神经纤维层(nervefiberlayer，NFL)较稀疏呈水平排列；神经节细胞层(ganglioncelllayer，GCL)排列整齐，胞核较