猪繁殖与呼吸综合征病毒orf5a功能的研究

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1、密级：论文编号:中囯农北科学院学位论文猪繁殖与呼吸综合征病毒ORFSa功能的研究DissectionofFunctionofORF5aforPorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus硕士研究生：白云指导教师：田志军研宄员申请学位类别：农学硕士专业领域名称：预防兽医学研宄方向：动物疫苗与分子疫苗学培养单位：哈尔滨兽医研宄所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果.尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宂成果，也不包含为获得中国农业科学

2、院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宂所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名：負i时间t^年6月$曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文》同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宂生签名：周i时间：年6月多曰中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目猪繁殖与呼吸综合征病毒〇RF5a功能的研宄动物疫苗与论文作者白

3、云专业预防兽医学研宄方向分子疫苗学指导教师田志军研究员培养单位（研究所）哈尔滨兽医研宂所硕（博）姓名职称单位专业签名导师评硕导口中国农业科学院王秀荣研宂员预防兽医学博导0哈尔滨兽医研宄所阅硕导□上海交通大学朱建国预防兽医学人博导□农业与生物学院辩答答辩主席一硕导口隋广超教授东北林业大学基础医学博导0硕导口华育平东北林业大学博导0硕导口周恩民教授西北农林科技大学博导B硕导口中国农业科学院蔡雪辉研宄员预防兽医学博导B哈尔滨兽医研宄所硕导口中ffl农业科学院仇华吉研宄员预防兽医学博导0哈尔滨兽医研宄所硕导□博导□硕导口博导口硕导口博导□会议记录（秘书>王刚论文答辩时间地点2015年5月25曰主

4、楼学术报告厅317密级:论文编号:中国农业科学院学位论文猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5a功能的研究DissectionofFunctionofORF5aforPorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus硕士研究生：白云指导教师：田志军研究员申请学位类别：农学硕士专业领域名称：预防兽医学研究方向：动物疫苗与分子免疫学培养单位：哈尔滨兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationDissectionoffunctionofORF5aforPo

5、rcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusM.S.Candidate：YunBAISupervisor：Zhi-JunTIANMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:AnimalVaccineandMolecularImmunologyMay2015摘要猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV）属于RNA病毒中的单股正链RNA病毒，该病毒与马动脉炎病毒（equinearteritisvirus,EAV）、猴出

6、血热病毒(simianhemorrhagicfevervirus,SHFV)和小鼠乳酸脱氢酶升高症病毒(lactatedehydrogenase-elevatingvirus，LDV)同属于动脉炎病毒属。PRRSV根据其基因型分为I型（欧洲）和II型（美洲），而国内的流行毒株主要为II型PRRSV。最新研究通过序列分析发现一个普遍存在于动脉炎病毒属的开放性阅读框—ORF5a，利用反向遗传操作系统对ORF5a的重要性进行验证，发现其对EAV起重要作用，并对PRRSV的存活是必需的。但是ORF5a是以何种方式起作用，具体的功能是什么尚不明确，有待进一步的研究。本研究利用反向遗传操作技术，对O

7、RF5a的功能做进一步的探讨，为PRRSV的基础性研究奠定基础。本研究在实验室已有的PRRSV的感染性克隆质粒pHuN4-F112上进行改造，将ORF5a的起始密码子ATG突变为GTG，构建了ORF5a失活的感染性克隆质粒pHuN4-F112-Δ5a，体外转染BHK-21细胞后在MARC-145细胞上拯救病毒。结果表明，拯救毒株在MARC-145细胞上传代的第一代可以检测到PRRSV的基因组，但是检测不到病毒蛋白，证明ORF5a的存