泥蚶smad15、bmp24基因的克隆、表达分析及生长性状相关snp位点筛选

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1、学校代码：10264研究生学号：M120150380上海海洋大学硕士学位论文泥蚶Smad1/5、BMP2/4基因的克隆、题目：表达分析及生长性状相关SNP位点筛选CloningandspatiotemporalexpressionanalysisofSmad1/5,BMP2/4geneand英文题目：growthtraitsrelatedSNPscreeningintheTegillarcagranosa专业：渔业研究方向：贝类分子遗传育种姓名：钱雪骏指导教师：林志华研究员二O一五年六月一日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道

2、德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学博/硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注尤仲杰宁波海洋与渔业研究院研究员主席李成华宁波大学教授委员王伟浙江万里学院副教授委员委员委员委员委员董迎辉浙江万里学院副研究员秘书答辩地点浙江万里学院64#205答辩日期2015.06.05上海海洋大学硕士学位论文泥蚶Smad1/5、BMP2/4基因的克隆、表达分析及生长性状相关SNP位点筛选摘要泥蚶（Tegillarcagranosa）是我国四大传

4、统养殖贝类之一，具有较高的营养价值和药用价值，深受沿海地区居民的喜爱。但是目前，对包括泥蚶在内的软体动物的生长调控机制尚不清楚，进而制约了高效率的快速生长性状定向培育优良品种的分子标记辅助育种技术研发进程。转化生长因子β(transforminggrowthfactorβ，TGF-β)超家族是一组结构相关性的多功能细胞因子，在细胞增殖、分化和生长等生物学过程中发挥重要作用。该超家族中具有众多生长相关功能基因，本研究就对其中的Smad1/5基因和BMP2/4基因在泥蚶中的作用机制展开了探究，以期为泥蚶分子标记辅助育种（molecularmarker-assistedsel

5、ection，MAS）提供理论基础，使育种更具针对性，缩短泥蚶育种周期，降低育种成本，改进传统选育技术，大力发展泥蚶健康养殖产业。研究结果如下：1.获得Smad1/5基因的cDNA全长、基因组结构及其时空表达特征。利用RACE方法克隆得到泥蚶Smad1/5基因（Tg-Smad1/5）的cDNA全长序列（GenBank登录号：KP250873），该序列全长2424bp，开放阅读框（openreadingframe，ORF）有1386bp，编码462个氨基酸。Tg-Smad1/5蛋白与双壳贝类中合浦珠母贝（Pinctadafucata）、太平洋牡蛎（CrassostreaI

6、上海海洋大学硕士学位论文gigas）的同源性分别达到了92.3%、91.2%。在cDNA序列基础上，利用普通PCR方法克隆获得了Tg-Smad1/5基因的3个内含子，大小分别为504bp，553bp，874bp，均属于GT-AG-内含子。利用染色体步移（genomewalking）技术克隆得到泥蚶Smad1/5基因启动子序列，该片段长从5’末端到起始密码子ATG的长度为934bp，包含GATA框、八聚体转录因子（Oct-1）等结构，符合启动子序列特征。利用实时荧光定量PCR（real-timefluorescencequanititativePCR，qRT-PCR）技术

7、，研究了Smad1/5基因在泥蚶6个组织和9个发育时期中的表达情况，结果显示，Tg-Smad1/5基因在泥蚶成贝6个组织中均有表达，而在斧足中的表达量最高，极显著地高于其他组织；在各发育时期中，Tg-Smad1/5表达量随发育进程呈逐渐升高的趋势，在眼点幼虫期达到最高，极显著高于其他时期，而在变态至稚贝时，表达量又极显著地下降。研究结果表明，Tg-Smad1/5具有类似于高等动物的分子结构，并在泥蚶不同组织、不同发育时期表达有所差异，这为进一步研究该基因在贝类中的功能和作用机制奠定了重要基础。2.BMP2/4基因的扩增及其时空表达特征的研