沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究

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1、分类号Q95单位代码10447密级无研究生学号1210190105硕士学位论文论文题目沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究研究生姓名朱育玮专业名称动物学指导教师姓名李玉保学院农学院论文提交日期2015年6月原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，论文中不含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得聊城大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：朱育玮日期2015.6.7导师签名：李玉保日期2

2、015.6.7学位论文使用授权声明本学位论文作者完全了解聊城大学有关保留、使用学位论文的规定，即：聊城大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权聊城大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它手段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名：朱育玮日期2015.6.7导师签名：李玉保日期2015.6.7聊城大学硕士学位论文摘要噬菌体是一类病毒，因其主要感染细菌，又叫作细菌病毒。广泛存在于自然界且种类复杂多样。近半个世纪以来，随着养殖密度的增加及抗生素无节制滥用，大量耐药菌株不断出现。噬菌体的天然杀菌能

3、力，可作为治疗细菌感染的有效手段，正被人们广泛关注。本课题运用直接法从聊城市某现代化肉鸡养殖场采集污水、粪便和垫料等样品，分离、鉴定出20株沙门氏菌作为宿主菌。样品经宿主菌悬液富集，利用双层琼脂平板法以及液体纯化法分离并纯化得到3株沙门氏菌裂解性噬菌体PS5、PS8、PS11。通过宿主菌感染实验分别测定了噬菌体宿主谱、效价、温度和PH的稳定性、最佳感染复数、一步繁殖曲线以及4℃保存效价的衰减规律，并测定了噬菌体的抑菌活性及不同时长、不同效价噬菌体处理沙门氏菌的规律。结果将为利用噬菌体防治沙门氏菌提供科学依据，具有重要理论意义和应用价值。研究主要内容如下：1.噬菌体形态学观察以分离

4、到的沙门氏菌为宿主，从样品中分离并纯化出3株噬菌体PS5、PS8和PS11，且均为裂解性噬菌体。经透射电镜观察，噬菌体PS5头长约74.1nm，宽约74.1nm，属于无尾结构的二十面体；噬菌体PS8头长约70.3nm，宽约70.3nm，属于无尾结构的二十面体；噬菌体PS11头长约92.6nm，宽约92.6nm，属于无尾结构的二十面体。2.噬菌体宿主谱测定通过对噬菌体PS5、PS8、PS11进行交叉宿主感染实验，测定噬菌体的宿主谱。实验结果显示：噬菌体PS5、PS8只能感染各自的宿主菌，而PS11不仅能感染宿主菌S11，还能感染沙门氏菌S8，是一株宽宿主谱噬菌体。3.噬菌体PS11

5、温度和PH稳定性测定通过设置不同的温度：30、40、50、60、70、80℃和不同的PH：3、4、5、6、7、8、9、10、11分别处理噬菌体PS11原液60min，测定处理后PS11的感染效价。实验结果显示：噬菌体PS11的适宜温度范围为30-50℃，适宜PH范围为7-9。4.噬菌体PS11最佳感染复数测定通过设置噬菌体PS11感染沙门氏菌S11的不同感染复数：0.01、0.1、1、10、100，测定感染后PS11的效价。实验结果显示：噬菌体PS11对沙门氏菌S11的最佳感染复数为0.1。聊城大学硕士学位论文5.噬菌体PS11一步繁殖曲线测定通过定时取样测定噬菌体PS11感染沙

6、门氏菌S11的效价，绘制出PS11对S11的一步繁殖曲线。实验结果显示：噬菌体PS11的潜伏期约为20min，裂解期约在20-95min，吸附率为61.4%，平均裂解量为450。6.噬菌体PS114℃保存效价衰减规律测定将噬菌体PS11以菌悬液形式4℃保存，每隔10天测定一次效价，直到检测不到效价。实验结果显示：噬菌体PS11菌悬液4℃保存能够保持活性达70天以上，80天内仍然具有活性。7.噬菌体PS11抑菌活性测定通过浊度法测定噬菌体PS11与沙门氏菌S11混合液吸光度OD600nm值的变化。实验结果显示：PS11在初始5h内抑菌效果十分明显，5h后，抑制作用减弱，S11浊度上

7、升，但仍低于空白组浊度。8.不同时长、不同效价噬菌体PS11处理沙门氏菌S1123456不同稀释度的噬菌体PS11液：10、10、10、10、10分别处理沙门氏菌S111h、2h、3h后，测定沙门氏菌S11的浓度。实验结果显示：噬菌体效价相同时，沙门氏菌S11数量随着处理时间增加而下降，且降低98%左右后保持平衡；处理时间相同时，沙门氏菌数随着噬菌体效价增加而下降，且在降低98%左右保持稳定。关键词：沙门氏菌；噬菌体；生物学特性聊城大学硕士学位论文ABSTRACTBacterio