斑马鱼c-cbl基因ring finger结构域突变导致的骨髓增殖性疾病及功能研究

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1、斑马鱼c-cbl基因RingFinger结构域突变导致的骨髓增殖性疾病及功能研究博士研究生:彭小兰学号:0077209052学科专业:遗传学导师：刘廷析研究员导师小组：陈赛娟研究员周勇研究员邓敏老师上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室2013年4月本课题受国家自然科学基金委重点项目（项目编号：30830047），中国科学院战略性科技先导专项（子课题编号：XDA01010106）资助1ThePOINTMUTATIONofZEBRAFISHc-cblGENERINGFINGERDOMAININDUCEDMYELOPROLIFERATIV

2、EDISEASEANDITSFUNCTIONALRESEARCHstudent:XiaolanPengstudentIDnumber:0077209052specialty:geneticssupervisor:ProfessorTingxiLiuProfessorSaijuanChenProfessorYongZhouProfessorMinDengRuijinhospitalaffiliatedtoShanghaijiaotonguniversityschoolofmedicine,Shanghaiinstituteofhematology2013．4Funded

3、by:Keyprojectofnationalnaturalsciencefoundation(projectnumber:30830047);Chineseacademyofsciences,strategictechnologypilotprojects(projectnumber:XDA01010106)2上海交通大学学位论文原创性声明，本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下独立进行研究王作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均

4、已在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期亦少年／：伤如３上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在＿＿年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密＾＂＂（请在上方框内打Ｖ）学位论文作者签名指导教

5、师签名＂曰期；年月曰曰期：年月曰如／３ＸＴ／＾４上海交通大学医学院博士学位论文斑马鱼c-cbl基因RingFinger结构域突变导致的骨髓增殖性疾病及功能研究摘要作为造血干细胞的关键能力，自我更新和分化受到细胞内转录因子和信号网络的共同严密调控。任何自我更新和分化的调控异常都可能导致血液疾病发生。通过反向遗传学的方法我们已经知道了一些基因如pten、bmi1、hoxb4、wnt等与造血干细胞的自我更新密切相关，但是已知的非常有限。因此我们在一个活体动物内进行全基因组饱和的、表型驱动的、无主观误差的正向遗传学筛选。基于斑马鱼造血系统遗传学调控网络与人类有高

6、度的相似性，我们设计应用ENU化学诱变技术，获得了近1,000个斑马鱼F2代隐性遗传突变家系，采用全胚胎原位杂交技术在F3代中进行筛选，确定影响定向造血干细胞发育、迁移和自我更新的突变家系，随后定位克隆这些关键基因并评估它们在人类造血干细胞疾病和白血病肿瘤干细胞恶性转化中的地位和作用。目前已有的一些造血相关突变株，比如影响造血干细胞的早期发育的突变株spt（tbx16）、snh（bmp7）等，影响造血分化晚期各系的突变5上海交通大学医学院博士学位论文株如sau（als2）、ret（band3）,但是直接影响造血干细胞的突变株很少，如bls等。我们的筛选使用的是定向造血

7、干细胞的标记runx1、c-myb来做原位杂交，因此筛到的很多突变都与造血干细胞有着密切的关系，本论文应用c-myb作为造血干细胞的标记进行了大规模三代遗传学筛选，发现了一个在斑马鱼肾脏和尾部造血组织（CHT）都有很明显且很特异表达升高的突变株LDD731。对这一突变株进行了造血表型的详细分析，得出以下几点结论：1）突变株LDD731定向造血干细胞有明显的增加，髓系、红系、单核巨噬系细胞也有明显的增加，而T淋巴细胞是正常的。定向造血干细胞的增加从3dpf（dayspost-fertilization）起已经可以通过原位杂交来区分，5dpf可以从光镜下