齐口裂腹鱼mhcⅱa基因的克隆、组织分布及其在胚胎和仔鱼中表达的初步研究

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1、４４０分类号：Ｓ９１７学号：Ｓ２０１２３＾．Ａ四川农业大学＇‘Ｖ硕±学位论文＇？．，４一、？齐口裂腹鱼ＭＨＣＩＩＡ基因的克隆、姐织分布及其在胚胎巧仔鱼中表达的初步硏究李正杰．＜ｒ？？？．？＿．－Ｗ、．．－．一、；指导老师＾；化宗君副教授－．户４Ｖ，；学科专业：水产养殖学，；八—研究方向；乂产养殖原理与巧术云３心．．．．．．ｕｒ，．‘‘－Ｕ，？■＇■＇％＾户＇．；：；．Ｖ■？‘－（

2、，．’＇．Ｉ．Ｕ；占？■ｒ＂ｒ＼Ｖ．，．、‘；、｛Ｖ．＼Ｌ＇■、－节、＼－－Ｖ－Ｖ／：＾＇．２０１５５．二年月吟二进；．？、一．．产一．。＊．－＇？－，々＇＇、中＊．．＇？一，／户？．；‘？’．．一；．，；．．－＇＇－‘／，这踩，ｆ占．’’．‘ｒ心’＇＇－＇－．＇ｋ＇．，Ｖ三＇，；．？；．护．－Ｖｉｒ论文独倒性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作

3、所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学一位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＊、。研究生签名；４足走＞１／／年月２曰关于论文使用授巧的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，化许论文被查阔和借阀，可Ｗ采用影印、缩

4、印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。□本论文保密，在。＿＿年解密后适用本授权‘二＂＂（请在Ｗ上□内划ａ／）研究生签名廷去－从＾年之；４种曰导师签名年王曰少＂戸本研究受到下项目资助；四川省科技成果转化项目；齐口裂腹鱼人工养殖技术研究与示范。摘要本文Ｗ齐口裂腹鱼为研究对象，克隆其ＭＨＣｎＡ基因，初步探究该基因的分子多态性、组织表泣的特异性Ｗ及在胚胎和仔鱼中的差异性表运模式，Ｗ期为齐口裂

5、腹鱼的一抗病育种研究提供定的理论基础。主要组织相容性复合体（ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ一ＣｏｍｌｅｘＭＨＣ）的ＩＩ类分子是脊椎动物中种编码细施表面糖蛋白，具有高度多志性ｐ，的基因，且部分基因型与机体抗病力存在较强的相关性。本研究首先利用同源克隆和ＲＡＣＥ技术获得齐口裂腹鱼ＭＨＣＩＩＡ基因的ｃＤＮＡ全序列，其次借助测序法分析了该基因的开放阅读框（ＯＲＦ区）的多态性，最后运用实时巧光定量ＰＣＲ检测其组织分布一Ｗ及在同亲本的胚胎和仔鱼中表达情况。主要研究结果如下；（１）齐口裂腹鱼ＭＨ

6、ＣＩＩＡ基因的ｃＤＮＡ序列全长为９０９ｂｐ（Ｇｅｎｅｂａ址登陆号；’’３７５－６４ｂＯＲＦ７１－ＫＭ６７０４），其中ＵＴ民为ｐ，区为１ｂｐ，３ＵＴ民为１３５ｂｐ，并含有典型聚腺巧酸化信号（ＡＡＴＡＡＡ）和２７个Ｐｏｌｙ（Ａ）。编码蛋白含有２３６个氨基酸，其推测的＝５。二蛋白质分子量为２．９４Ｋｄａ，理论等电点为ｐｌ４．６０其预测的级结构同其它物种具有－－典型的ＭＨＣ２１２、１ＩＩＡ的结构特征，包含Ｉ个信号狀、个胞外结构域（ａ和ａ）个跨膜区和１个胞质区。编码蛋白的氨基酸序列存在４个保守的半腕氨

7、酸残基、经典的氨基酸ＧＸＸＸＧＸＸＧＸＸＸＧ＂Ｗ及Ｃ／ｏｖｆｌｒ框架结构丰富的雜酸化位点，且与建經（ｙｐ沁Ｗｃａ邮同源性最高，相似度为８３．０３％。（２）从８尾健康成鱼中得到１７条不同的ＭＨＣＩＩＡ基因的ｃＤＮＡ序列，其中最多１４１５２尾获得条不同序列。分析表明该基因至少编码条不同的氨基酸序列，至少含有￣个基因座。其中１条氨基酸序列与其它１４条的同源性为８９．６％９４．２％，序列间的差异５￣介于．８％１０．４％之间。同时在编码的氨基酸残基中共发现５０个变异位点３５，其中个－变异位点主要集中于ａ

8、１区，占变异位点总数的７０％，表明该基因具有髙度的多态性。（３）ＭＨＣＩＩＡ基因在所检测成鱼的１９个不同脏器组织中均有分布，但表达量差异显著、头腎、中肠、前肠、后肠、脾脏、红肌和也脏，体现出表达的组织特异性。中肾中的表达量较窩，脑、卵巢、肝膜脏、饋条、白肌中的表达量次之。该基