齐口裂腹鱼mch、crh和gnrh2基因的克隆、组织分布及摄食功能研究

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1、万方数据StudentsNo．：S20l14001SichuanAgriculturalUniversityMasterdegreeDissertationCloning，tissuedistributionandfeedingregulationofMCH，CRHandGnRH2inSchizothoraxprenantiAuthor：TaoWangDirectedby：Prof．Zhi—qiongLiMajor：DepartmentofaquacultureResearchArea：FeedandNutrit

2、ionofaquacultureJune，2014，万方数据论文独创性声明㈣㈣舢㈣Ⅷ咖圳㈣Ⅲ㈣JO121302本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：互函力修年舌月夕日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关

3、保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。口本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”)研究生签名：互函刷磁和专朱加竹年(7月／勺日砌f中年(7月／D日万方数据四川农业大学硕士学位论文齐口裂腹鱼MCH、CRH和GnRN2基因的克隆、组织分布及摄食功能研究摘要为研究黑色素聚集激素(me

4、lanin．concentratinghormone，MCH)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin．releasinghormone，CRH)和促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasinghormone，GnRH)基因在齐口裂腹鱼摄食调控中发挥的作用，本试验首先利用RT．PCR和RACE技术首次克隆了齐口裂腹鱼(Schizothoraxprenanti)MCH、CRH和GIlIm2的cDNA全序列；随后运用荧光定量PCR技术对MCH、CRH和GnRH2在不同组织的分布进行了检测

5、；最后研究在不同摄食状态下MCH、CI瑚和G11Im2mRNA在下丘脑表达的影响变化。研究结果表明：齐口裂腹鱼MCHeDNA全长序列为589bp，其中57非编码区(57．UTR)66bp，3’非编码区(37．UTR)148bp，开放阅读框(ORF)375bp，编码124个氨基酸包括N末端24个氨基酸的信号肽、C末端17个氨基酸的成熟肽和13个氨基酸的神经肽Mgrp，与金鱼(Carassiusauratus)的MCH的序列同源性最高，相似性可达到90．3％；齐13裂腹鱼CRHcDNA全长序列的长度为1046bp，其

6、中57．UTR为127bp，37．UTR为430bp，ORF为489bp，编码162个氨基酸包括24个氨基酸的信号肽、41个氨基酸的成熟肽和11个氨基酸的保守区域，与鲤科鱼类特别是鲤鱼(Cyprinuscarpio)CRH氨基酸序列一致性最高为96．3％；齐口裂腹鱼GnRH2cDNA全长序列的长度为693bp，其中5’．UTR为160bp，3’．UTR为272bp，ORF为261bp，编码86个氨基酸包括24个氨基酸的信号肽、10个氨基酸的成熟肽和49个氨基酸的GnRH相关肽，其氨基酸序列与鲤鱼，稀有绚鲫(Gob

7、iocypr&rarus)和斑马鱼(Daniorerio)的GnR／-12具有很高的一致性分别为98．6％、95．9％、90．5％。利用qPCR对齐口裂腹鱼MCH、CR_H和GnRH2mRNA在不同组织的表达进行检测，结果显示：MCH、CR．H和GI瓜H2mI冰A在脑部的表达量最高。MCHmRNA主要在大脑和垂体分布，而在其他外周组织几乎没有表达。进一步对脑部区域检测发现，MCHmRNA在下丘脑的表达最高，而在其他脑区域的表达都很低。CRHmRNA在外周组织中广泛表达，进一步研究CRH在脑部不同区域的表达的发现，

8、除了小脑中几乎没有检测到CRHmRNA表达外，在其他区域均有表达且下丘脑的表达量最高。GnRH2mRNA在所检测的组织中都有表达，进一步研究GnRH2在脑I万方数据部不同区域的表达的发现，GnRH2mRNA在脑部的不同区域都有表达，表达最高的是在下丘脑。在餐前餐后的试验中设置7个处理组，且每个处理组放养15尾鱼(体重为39．424-3．619)，将11：oo作为0时每天进