齐口裂腹鱼无乳链球菌的分离鉴定及其感染的病理学研究

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1、万方数据ClassificationNumber墨坌垒!：丝SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationPathologyandpathogendistributionstudyofStreptococusagalactiaenaturalinfectedinSchizothoraxprenantiByZhangJiaDirectedbyProf．GengYiBasicVeterinaryMedicineSichuan，Ya’an，ChinaJune，2014万方数据

2、论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：缸陟沙，y年石月乒日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川I农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借

3、阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：锯陟引磴钮砰加r够年f月钐日&。‘匕年f月乞日万方数据中文摘要无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)，又称为B群链球菌，是一种典型的人．兽．鱼共患病原菌，普遍存在丁^世界各地，严重威胁着人类和动物的健康。自1958年日本首次报道虹鳟感染链球菌的病例后，相继有大量的关于无乳链球菌感染养殖鱼和野生鱼类的报道，给世界养殖业造成巨大的经济损失。2012与2013年的7～

4、】0月四川齐口裂腹龟养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病，在肝、肾涂片检查中发现链状G+球菌。从自然发病鱼肝、肾分离到2株形态与涂片检查一致的G+链状球菌(DMI．120817、YZHl30830)，其在BHI平板上28℃培养48h，形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落；根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)；16SrRNA基因序列分析表明，2分离株(GenBank登录号：KF773744、KF761304)与GenBank中S

5、agalactiae16SrDNA序列同源性达96．5％以上，在以分离菌16SrDNA序YoJ(GenBank登陆号KF773744与KF761304)及其GenBank中同源性较高的链球菌16SrDNA序列构建的系统发育树上，分离菌与Sagalactiae聚为一族；同时在基于无乳链球菌∞基因进行的特异性PCR检测中，分离菌均为阳性。对自然感染鱼进行病理剖解观察其眼观病变，同时取心、肝脏、。肾脏、脾脏、肠、脑、肌肉和鳃等组织，10％甲醛溶液固定，常规石蜡切片，观察无乳链球菌感染造成的病理损伤。结果表明，感染鱼主要表现突眼、体表出

6、血和神经症状的临床表现；病理组织学观察发现，Sagalactiae感染齐口裂腹鱼对多组织器官都造成明显的病理损伤，尤其是肝、肾、脾、和脑的损伤较为严重，表现为明显的变性、坏死以及炎症细胞浸润，主要表现为肝炎、急性脾炎、问质性肾炎、脑膜脑炎、心外膜炎。超微结构上，球状的Sagalactiae侵入肝细胞、l肾小管上皮细胞、肾问质、脾髓、淋巴细胞与脑内，部分细菌见荚膜形成，被侵袭细胞的线粒体肿胀，嵴断裂，溶解，内质网扩张，甚至细胞器结构完全破坏，溶解，细胞膜破裂溶解。脑内胶质细胞增生，核膜扩张，神经纤维髓鞘变性，溶解。同时在肝毛细血管

7、与肝血窦内，肝、脾和肾问质的巨噬细胞与内皮细胞内见多量菌体，且一些菌体处于分裂状态。关键词：齐口裂腹鱼；无乳链球菌；16SrDNA；cfb基因；分离鉴定；病理形态学万方数据AbstractStreptococcusagalactiae(GroupBstreptococcus)hasemergedasanimportantpathogenthataffectshumansandanimals，includingaquaticspecies，whichhasbecomeathreatagainstthehealthofhumansa

8、ndanimals．SinceHoshinaeta1．reportedthefirstoutbreakofstreptococcosisinrainbowtrout(Oncorhynchusmykiss)culturedinJapan，streptococcos