饲用混合菌的富集培养及冻干工艺研究

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1、硕士研究生学位论文摘要新疆大学论文题目（中文）：饲用混合菌的富集培养及冻干工艺研究论文题目（外文）：Studyonenrichmentcultureoffeedmixedbacteriaandfreezedryingprocess研究生姓名：热孜弯姑·雪合热提学科、专业：生物学微生物学研究方向：微生物资源开发与利用导师姓名职称：乌斯满·依米提副教授论文答辩日期2015年5月22日学位授予日期年月日IMagisterialThesisStudyonenrichmentcultureoffeedmixedbacteriaandf

2、reezedryingprocessMasterDegreeCandidate:RiziwangvlXohretMentor:prof.WusimanYimitiCollegeofScienceandTechnologe,XinjiangUniversityUrumqi,XinjiangMay,2015I摘要饲用乳酸菌是一种直接能添加到青绿饲料里的青贮发酵剂，由于其含有大量的产酸能力比较强的乳酸菌，故而能迅速降低青贮饲料的pH值，有效的抑制有害菌生长繁殖，提高青贮饲料的发酵品质，但乳酸菌不能利用纤维素，因此提高青贮饲料消化率

3、效果不太理想；目前为止，在国内外提高青贮饲料消化率的主要方法是青贮饲料发酵过程中添加纤维素分解酶和乳酸菌混合液。纤维素分解酶能够分解植物的细胞壁，从而使得植物的纤维含量下降给乳酸菌提供较多的碳水化合物，促进青贮发酵品质，能够改善动物饲料的消化率和生产性能，有效的提高青贮饲料的营养价值，还能延长保藏期。但青贮饲料生产中发酵温度不断的提高达到60℃以上使纤维素酶变性失活,因此青贮饲料的发酵品质和消化率受到影响,另外在青贮饲料实地生产中需要大量的纤维素分解酶，制备复杂，成本相对较高，重复利用率低。近几年来本研究室进行的实验结果得知

4、，筛选出的乳酸菌具有生长范围广，耐酸和产酸能力比较强等优势，纤维素分解菌也具有生长范围比较广，耐酸能力和纤维素分解能力比较强等优势。混合培养得知，两菌之间没有相互抑制作用，这为研究与开发混合菌饲料添加剂提供一定的科学依据。目前为止，混合菌添加剂的研究还处于液体状态，实际生产中需要量大的菌悬液，菌悬液的运输和保藏不便，因此，混合菌粉饲料添加剂的研究与开发在降低高品质青贮饲料生产成本，提高发酵品质,消化率及缓解饲料短缺等方面有一定的经济和社会意义。本研究选用高效乳酸菌(A4+A7）和纤维素分解菌(Nf+Y6）为实验菌种，探讨和确

5、立了混合菌培养基的优化及混合菌体富集培养、混合菌冻干以及复活条件优化等工艺,初步研究出饲料乳酸菌和纤维素分解菌混合菌体冻干菌粉制备的技术路线和工业参数，为将青贮饲料冻干混合菌粉添加剂的工业化生产提供了理论依据。1.饲用高效乳酸菌A4+A7(从玉米秸秆中分离得到）和纤维素分解菌Nf+Y6(从牛、羊瘤胃中分离得到）富集培养结果表明：不同处理组中两株菌相同I比例（1:1）混合培养在2.0%蔗糖+（尿素：盐=2.0%：1.0%）溶液中，达到稳定9期时间最短，12h进入稳定期，活菌数量最高，活菌数为4.49×10cfu/ml；（混8合

6、菌在2.0%蔗糖溶液中培养时活菌数仅为1.62×10cfu/ml）。2.采用离心分离法进行混合菌体离心，结果得出，在离心力为4000g、离心转速为5000r/min、离心温度为20℃、离心时间为15min的条件下饲用混合菌体的离心效果最好，离心存活率为88.9%，并且上清液中几乎没有菌体残留。3.将通过离心分离法分离得到的混合菌沉淀物与8种保护剂单独混合均匀，在不同的低温条件下进行预冻，预冻结果表明，混合菌在预冻温度为-20℃时存活率最高；混合菌沉淀物与不同保护剂混合均匀进行冷冻干燥，最佳复合冻干保护剂配方是脱脂乳10.0%

7、，抗坏血酸2.0%，海藻糖6.0%，葡萄糖1.0%以及冻干厚度为0.5cm时的冻干存活率最高，可达到87.92%；冻干结束后,冻干混合菌粉和复活剂按10：1.0比例混合均匀并测出复活存活率，结果可知，冻干混合菌粉的最佳复活剂为12%脱脂乳；当12%脱脂乳与冻干混合菌粉按1.0：10比例混合均匀，在25℃下复活15min时混合菌存活率最高,可到达88.79%。关键词：青贮饲料；混合菌离心分离；冻干工艺；复活IIAbstractFeedinglacticacidbacteriaisakindofdirectlyaddedtoth

8、esilagefermentationagentingreenfeed,becauseitcontainsalotoflacticacidbacteriahavestrongacidproducingability,lacticacidbacteriacanrapidlyreducethe