猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株rt-pcr鉴别检测方法的建立及初步应用

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1、分类号：S858.28单位代码：10193密级：公开学号：20130692专业硕士学位论文猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株RT-PCR鉴别检测方法的建立及初步应用EstablishmentandPremaryApplicationofRT-PCRforDistinguishingDifferentStrainsofPorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus作者姓名：杨洺扬学位类别：兽医硕士专业名称：兽医学研究方向：动物传染病防治指导教师：胡桂学教授所在学院：动物科学技术学院2015年06月

2、独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位

3、期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月

4、日摘要猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的急性或亚急性高度接触性传染病，主要侵害妊娠母猪和未断奶仔猪，具有传播速度快、死亡率高的特点，严重威胁养猪业的健康发展。PRRSV基因易发生变异，产生多种不同变异毒株，给疾病的防控带来很大困难。2006年爆发的高致病性猪繁殖与呼吸综合征给我国养猪业造成巨大打击。目前国内流行的毒株均为美洲型，主要为经典型毒株和毒力较强的高致病性毒株。由于PRRSV不同毒株感染动物后的临床表

5、现、危害程度及其疫苗交叉保护力不尽相同，及时准确鉴定出当前流行毒株对防治猪繁殖与呼吸综合征具有积极意义。猪繁殖与呼吸综合征经典毒株、高致病性毒株、基因缺失弱毒疫苗株（TJM-F92)的Nsp2基因存在部分差异。高致病性毒株和基因缺失疫苗株分别存在90个和450个不连续核苷酸缺失。本研究在其缺失位点两端设计引物，根据扩增目的片段大小不同区分三种不同毒株，建立RT-PCR鉴别检测方法。通过实验证明，该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性，对三种毒株的扩增产物大小分别为1332bp、1242bp和882bp。使用此RT-PCR检测方法检测吉林

6、、黑龙江等地区68份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,发现经典毒株检出率为13.23%，高致病性毒株检出率为20.58%，基因缺失疫苗TJM-F92株检出率为8.82%。本研究建立了PRRSV不同毒株RT-PCR鉴别检测方法，能够检测猪繁殖与呼吸综合征病毒并鉴别其毒株类型，从而区分疫苗免疫猪和野毒感染猪，以及患病猪所感染的毒株种类，为有效预防PRRS、评价疫苗免疫效果以及净化该疫病奠定一定基础。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒，鉴别，RT-PCR，应用IAbstractPorcinereproductiveandrespiratorysyn

7、drome(PRRS)isanacuteorsub-acuteandhighlycontagiousdiseasecausedbyporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV).PRRSsignificantlyaffectspregnantsowsandbreedingpigs.Sincethevirusspreadsreadilywithhighmortality,PRRSbecomesthemostimportantswinedisease.Avarietyofstrai

8、nsresultingfromPRRSvirusvariationremainacontinuouschallengetocontrolofthedisease.Theoutbreakofhighlypat