柽柳thnac7基因的抗逆功能解析

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1、ｌ－打如＇；苗学校代码：１０２２５学号：Ｓ１巧０８学隹冷文捏柳７７Ｗ＾Ｃ７基因的抗逆功能解析浪明意指导教师姓名；王玉成教授东北林业大学申请学位级别；硕±学科专业；林木遗传育种论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月授予学位单位；东北林业火学授予学位日期：２０１５年６月答辩委员会主席：论文评閱人；京如义聲ＵｎｉｖｅｒｓｉｔＣｏｄｅｙ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ；Ｓ１５７０８ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｇＳｔｒｅｓｓＴｏｌ

2、ｅｒａｎｃｅＦｕｎｃｔｉｏｎＡｎａｌｓｉｓｏｆＴＨＮＡＣ７ｅｎｅｆｒｏｍｙｇＴａｍａｒｉｘｈｉｓｉｄａｐＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＺｈａｎｍｉｎｉｇｇｙＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＷａｎｇｙｕｃｈｅｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄ化ｒ：ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＦｏｒｅｓｔＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＴｒｅｅＢｒｅｅｄｉｎｇＤａ化ｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ２０１５Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅ

3、ｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙｉｍ摘要许多７Ｖ：４Ｃ基因的表达受干旱ＡＢＡ的诱导，有研究显示ｉＶ＾Ｃ基因调控了、高盐和植物的抗逆能力，参与植物细胞的多种生物学过程。然而，Ｍ４Ｃ基因在抗逆调控中的详细功能尚不清楚一ＡＣ基因。本研究通过对桂柳（历ｗａＷｘ／ｎ却Ｗａ）中克隆出来的条ＮｒＷＶ：４Ｃ７的抗逆性机制进行了研究。利用实时定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究了７７Ｗ＾Ｃ７基因对高盐、干旱［＾及ＡＢＡ胁迫的表达。结果表明，在怪柳幼的根部和茎叶组织，该基因均能够被ＮａＣｌ、ＰＥＧ和ＡＢＡ诱导表达。利用我们已经建立的瞬时侵染体系，同时我

4、们采用三种方法对瞬时转化过程进行改，进，分别运用王种方法将表达载体转入程柳幼苗内并对转ＰＢＩ１２１载体幼苗进行ＧＵＳ染色。检测到转ＧＣ／Ｓ基因在转基因幼苗内的各组织均有表达。从而证明这Ｈ种转化方法均能将过表达载体和抑制表达载体转入桂柳植株内。通过ＧＵＳ染色分析，转化方法１要优于方法２、３，方法１中的Ｇｔ／Ｓ基因，在侵染后第７周仍能检测到ＧＣ／Ｓ基因的表这。４７－ＴｈＮＡＣ构建的风ＭＣ基因的过表达载体Ｐ民ＯＫ２７、ＲＮＡｉ抑制表达载体ＴｈＮＡＣ７－ＲＮＡＢｍｉＷ及对照载俾ｐｉ，并将其瞬时转化到怪柳中，获得瞬时转化的ＴｈＮＡＣ７过表这、抑

5、制表达义对照植株。对转基因桂柳进行了实时定量ＰＣ民检测，过表达怪柳中的Ｍ４Ｃ７基因表达量增加了４倍，而抑制表达怪柳植株的Ｍ４Ｃ７基因表达量明显受到抑制，表达量是对照怪柳的１化。说明，ＴｈＮＡＣ７基因已经成功地在转基因程一柳中实现了瞬时的过表达义抑制表法，可Ｗ用于进步的实验。利用组织化学染色包括ＮＢＴ、ＤＡＢ和依文思蓝染色方法分析过表达、抑制表达和对照径柳幼苗的活性氧清除能力和细胞的死亡程度。在非胁迫情况下，Ｈ者的活性氧积ＮＡＣ累和细胞膜受损情况相似，而在胁迫下，Ｔｈ７抑制表达怪柳活性氧积累和细胞膜受ＮＡＣ损情况明显高于对照，而Ｔｈ７过表达

6、怪柳的活性氧积累和细胞膜受损情况明显低于－二－对照。接着对：者的失水率、电解质渗透率、叶绿素含量Ｗ及ＭＤＡ含量进行了进步测定，过表达植株的植物细胞的失水速率最低，胁迫后细胞内叶绿素含量最高，电解质，植物膜脂过氧化程度最低，渗透率最低。而抑制表达植株的细胞的失水速率最高胁迫后细胞内叶绿素含量最低，电解质渗透率最高，植物膜脂过氧化程度最高。说明，怪柳一巧基因能够响应非生物胁迫，该基因的过量表达能够増强植株的抗逆能力。进步论证了怪柳风Ａ／４７；Ｃ基因具有抗逆能力。７７Ａ／＾Ｃ关键词！怪柳：瞬时转化；非生物胁迫抗逆分析；；－１－Ａｂｓｔｒ

7、ａｃｔ＊ａ乂ｂｓｈｃｔＤ＊ｒｏｕｇｈｔｈｉｈｓａｌｔｏｒ人良Ａｃａｎｉ打ｄｕｃｅ７Ｖ／４Ｃｅ打ｅｔｏｅｘｒｅｓｓｅｎｅｏｖｅｒｅｘｒｅｓｓｉｏ打ｃａｎ，ｇｇｐ，ｇｐｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｄｒｏｕｈｔ１；ｏｌｅｒａｎｃｅｏｆｔｒａｎｓｅｎｉｃｌａｎｔｓ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｈａｓｓｈｏｗｎｔｈａｔｇｇｐｇｅｎｅｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉ打ｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏ打ｏｆｐｌａｎｔｃｅｌｌｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅａｎｄｍａｎｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓ