杨树psneif5a24基因的抗逆功能分析

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1、学校代妈；１０２２５学号：Ｓ１５７口学化冷文杨树尸基因的抗逆功能分析－■ｓｓｓｍ－？誉＂？？？赵思变指导教师姓名：曲冠证教授东北林业大学赵犧阳讲师东北林业大学申请学位级别：硕±学科专业；林木遗传育种论文提交日期１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月：２０授予学位单位：东北林祉大学授予学位日期：２０１５年６月答辩委员会主席；论文评阅人：义聲建从抑ＩＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：Ｓ１５７１２Ｄｉｓ

2、ｓｅｒｔａｔｉｏ打ｆｂｒｔｈｅＤｅｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｇＡｎａｌｓｉｓｏｆｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｙｏｆＰｓｎｅＩＦ５Ａ２／４ｅｎｅｇＣａｎｄｉｄａｔｅ；ＺｈａｏＳｉｗｅｎｕ－Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＧｕａｎＺｈｅｎＱｇＡｓｓｏｃ－ｉａｔｅＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＬｅｃｔｕｒｅｒＺｈａｏＸｉＹａｎｇＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅＡｐｐｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：Ｆｏｒｅ巧Ｔｒｅｅ

3、ＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇＤａ化ｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｌ２０１５ｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ摘要摘要植物的真核翻译起始因子（Ｅｕｋａｒｏｔｉｃｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ５Ａ，ｅＩＦ５Ａ）在多ｙ种生物学过程中起重要的作用，例如起始蛋白质的合成，参与ｍＲＮＡ的翻译及延伸，’调控细胞程序性死亡和增强植物的胁迫耐受能力等。本研究利用ＰＣＲ技术，从小黒杨（ｆｏ

4、ｐｗ／ｗｎ如Ｏｆ）叶片总ｃＤＮＡ中克隆得到２条杨树真核翻译起始因子基因的同源基因。基因序列分析显示，这２条基因（戶ｗｅ征心２和尸胃７ＫＷ４）的开放阅读框（ＯＲＦ）均为４８３ｂｐ，其预测编码１６０个氨基酸。氨基酸序列分析，ｅＩＦ５Ａ在各个物种间高度保守。系统进化树结果表明杨树ＰｓｎｅＩＦ５Ａ２／４与拟南芥ＡｔｅｌＦＳＡｌ是直系同源基因。氨基酸序列多重比较结果表明这两条基因序列彼此相似度为９８％。ＴＨ２－ｓｎｅ／ＦＦ戶Ｐ＿Ｌ４２／年Ｇ构建亚细胞定位表达载体ｐ，利用洋葱表皮进行亚细胞定位分化结果

5、显示ＰｓｎｅＩＦ５Ａ２／４蛋白均定位于细胞核和细胞质中。利用实时巧光定量ＰＣＲ分析户在杨树不同组织中的表法水平，结果表明戶在根、茎、叶及花序中均有表达，其中在成熟叶片中转录水平最高。分别用ＡＢＡ，ＣｄＣｌｚ，ＣｕＳ〇４，ＮａＨＣ〇３，ＺｎＳ〇４，甘露醇，ＮａＣＩ，和ＰＥＧ６０００胁迫小黑杨幼苗，通过巧光实时定量ＰＣ民检测不同胁迫下小黑杨叶片中斗的表达变化，结果显示上述胁迫均能诱导如７６瓜５心／４的表么尤其是重金属胁迫和盐处理，同时心也参与了小黑杨ＡＢＡ的信号传导途径。’－ｃｅｃｅｗｖｋ构建

6、酵母表达载体ＹＥＳ２Ａ？ｅ／Ｋ５心／￥（况［／ｗｒａｅｗｚｃｅ）ｐ，转化酿酒酵母巧ｙｃｌ比较转基因菌株和空载菌株在ＮａＣｌ，ＣｄＣｋ，尿喀睫营养缺陷型菌株ＩＮＶＳ，通过ＣｕＳ〇４，ＮａＨＣ〇３，ＺｎＳ化，山梨醇，Ｈ２化胁迫下的生长状况，结果显示在非生物胁迫下转基因菌株存活菌落数高于非转基因菌株，尤其是ＣｕＳ〇４，ＣｄＣｌ２，ＮａＣｌ胁迫最为显著，推测杨树基因具有增强酵母菌对重金属胁迫及盐胁迫的抵抗能力。－Ａｎ构建植物表达载体ｐＲ〇ＫＩＩｅＺＰ５＾２，通过农杆菌介导法转化拟南芥，比较在Ｃｕ

7、Ｓ〇４和ＮａＣｌ胁迫下野生型拟南芥和转基因拟南芥的生长情况。结果表明转基因拟南芥比对照有更高的发芽率，胁迫后的植株鲜重和叶绿素含量也显示转基因植株更高。在ＣｕＳ〇４和ＮａＣｌ胁迫下，测量野生型和转基因拟南芥植株的生理指标，结果表明转基因拟南芥表现出増强超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）活化并降低了丙二酵（ＭＤＡ）含量和相对电导率。利用ＤＡＢ、ＮＢＴＷ及Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ染色检测胁迫下野生型和转基因拟南芥的ＲＯＳ清除能力，结果表明戶转基因拟南芥具有更强的抗重金属和盐胁迫的能力。

8、＾＾＾＾＾。关键词：杨树＾记戶＾＾片巧：非生护／巧如：先薛母：拟南芥物胁迫－－ＩＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｈａｄＥｆｆｅｃｔｏｆｐｌａｎｔｅＩＦ５Ａｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎａｖａｒｉｅｔｙｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｓａｓｅｖｅｒｙｏｎｅｋｎｏｗｓ，ｓｕｃｈａｓｐｒｏｔｅ