微骨折技术联合富血小板血浆对兔膝关节软骨损伤修复作用的实验研究

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1、授予单位代妈10089学号或申请号20122242对泠(£搿HHebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位微骨折技术联合富血小板血浆对兔膝关节软骨损伤修复作用的实验研究研究生：龙玉斌导师：高石军教授专业：外科学二级学院：第三医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单

2、位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名导师签名二级学院领导签章：p/jr年>月^日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章:4^3月z午日目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………

3、………………4英文缩写………………………………………………………………8研究论文微骨折技术联合富血小板血浆对兔膝关节软骨损伤修复作用的实验研究前言………………………………………………………………9材料与方法………………………………………………………10结果………………………………………………………………14附图………………………………………………………………17附表………………………………………………………………26讨论………………………………………………………………28结论……………………………………………………

4、…………32参考文献…………………………………………………………32综述关节镜下行微骨折术对膝关节全层软骨损伤治疗的研究近况36致谢……………………………………………………………………43个人简历………………………………………………………………44中文摘要微骨折技术联合富血小板血浆对兔膝关节软骨损伤修复作用的实验研究摘要目的:由于关节软骨自身无血管淋巴管及神经分布，损伤后很难自身修复。如何处理膝关节软骨全层损伤是骨科领域的一大难题。目前临床有多种关节软骨修复的手术方法：组织移植术和细胞移植术等新兴技术，仅在试验阶段

5、，因其操作复杂，价格昂贵，目前还难以在临床广泛开展；微骨折技术(microfracture，MF)通过刺激未分化的骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞，最终修复软骨缺损；富血小板血浆(plateletrichplasma，PRP)通过浓集的生长因子促进细胞活化、增殖等参与损伤组织的愈合。由于后两者可以提供类似组织工程的种子细胞及生长因子，而且操作简单，因此微骨折技术结合富血小板血浆治疗软骨损伤是很有前景的研究方向，但目前关于其研究的报道甚少。本实验旨在观察不同时间、微骨折技术、自体富血小板血浆以及应用微骨折技术联合富血小

6、板血浆对膝关节软骨全层缺损进行修复的组织学变化，以探讨采用微骨折技术联合富血小板血浆治疗关节软骨缺损的疗效，从而为临床工作提供实验理论依据及指导意见。方法：1实验分组及模型制备：新西兰大白兔48只，进行随机分组，为A、B、C、D四组每组各12只。于兔右膝股骨内侧髁负重区建立全层软骨缺损的模型。A组：软骨缺损区不予处理；B组：关节内注射自体富血小板血浆；C组：软骨缺损区行微骨折术；D组：软骨缺损区行微骨折术并在膝关节内注射自体富血小板血浆。2采血：B与D组均于兔耳缘静脉取7-9ml静脉血，其中5ml注入肝素锂抗凝的真

7、空采血管中，2ml注入EDTA-K2抗凝真空采血管中，已备用。3自体PRP的制备：当中5ml静脉血进行二次离心，即第一次离心以2000r/min，离心10min，第二次离心转速时间均同上，制备PRP约0.5ml，术中注射关节腔内。1中文摘要4血小板计数：将EDTA-K2抗凝真空采血管中2ml静脉血放入血细胞分析仪中进行血小板计数，然后同样二次离心制备PRP，再将PRP进行血小板计数，验证制备出的PRP是否符合实验要求。5观察指标：术后8、12周每组随机处死6只实验动物，其中随机5只切开暴露右膝，对其进行大体观察并对

8、其进行大体评价，随后对损伤修复部位标本进行取材制成组织切片并行HE和甲苯胺蓝染色，另一组织标本行电镜(scanningelectronmicroscope，SEM)制片。组织学制片完成后分别对标本行光镜和电镜观察各组并对其进行相应组织学评价。结果：1大体观察：术后8周：A组：缺损区修复组织未能平整修复软骨缺损，缺损区与周边正常软骨边界清晰；B组：缺损区修复组