微生物处理海带饲料对刺参生长和免疫的影响

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1、乂连禮？大聲ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹｉ眉±享恆巧又ＤＯＣＴＯ民ＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ微生物处理海带饲料对刺参生长和免疫的影响学科专业＿＿＿＿＿＿＿生＿物＿化王强遠作者姓名王指导教师益丞生＿敎搜＿２０５答辩日期＿Ｊ＾１５＿博：ｔ学位论文微生物处理海带饲料对刺参生长和免疫的影响ｉ－ｔｆｆｅｅｄｆｆＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｃｒｏｏｒａｎｓｍｒｅａｏｎｔｈｅｇ；ｅｄｓｔｕ’．ｇｒｏｗｔｈａｎｄｉｍｍｕｎｉｔｙｏｆｏｓＡｃＡｗｗ細０＂＇ｃ

2、？ｓ如作者姓名：王熙涛学科、专业：生物化工学号：１１１１８０４７指导教师；徐永平（教較）完成日期；２０１５年５月夫途巧义乂＃ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｙｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体＆经发表的研究成果，也不包含其他臣申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均己在论文中做了明确的

3、说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承捏相关法律责任。处适郵诗利ｆ封＾争秦夜如於§学位论文题目：娘２作者签章：日期：Ｔｗｒ年＾月：？日＾夢务大连理工大学博壬学位论文摘要刺参是我国单品种产值和利润最高的水产养殖动物，具有极高的营养价值和经济价值。近年来随着市场需求的增长和天然资源的减少，刺参的人工养殖规模迅速扩大。随着刺参养殖的高密度集约化发展，占整个养殖成本５０％Ｗ上的饲料问题成为制约刺参养殖业健康发展的瓶颈。其中优质巧料匿乏、饲料利用率低及残巧败坏水质等问题是最至关重要的因素。本课题Ｗ产量高、成本低的海带饲料

4、原料为切入点，利用筛选出的有益微生物对海带原料中大量褐藻胶成分进行发酵降解一，研究开发种可供选择的具有原料増值功能的刺参微生物脱胶海带饲料。该饲料中难Ｗ被刺参消化吸收的褐藻胶成分可被微生物有效降解，从而显著提高刺参对海带饲料原料的利用率，促进其生长性能的提一升，，而且降解产物褐藻胶寡糖本身又是种免疫促进剂使原本不能被充分消化吸收的大量海带褐藻胶成为潜在的天然绿色刺参免疫增强剂。同时，有效发挥饲料中高活性有益微生物的益生作用，増强刺参肠道消化酶活性，更好地满足刺参对营养物质的吸收利用，并能抑制潜在条件致病茵的生长，促进刺参非特异免疫应答

5、，增强刺参对致病弧菌的抵御能力。论文主要工作如下：一一１利用褐藻酸钢为唯碳源的选择性培养基，从海泥中筛选得到株具有较高褐（）藻胶降解能为的茵株。１６ＳｒＤＮＡ测序及生理生化试验表明ＷＢ１属于水产常用菌属—ｃＷｄｍ公ａＷｗ属，系统发育树分析表明其与公邸诉ｓ有最高的同源性；高浓度腹腔攻毒试验表明化挪Ｍ矿ａｃｋｎｓＷＢ１对刺参无潜在致病性：体外抑菌试验表＇Ｈ种常见的刺参致病弧菌’明化口ｗｙ／ｏ的Ｗ脚７ｅｗＷＢ１对（Ｆｊ如巧庇ｎ泌疏５、Ｆｉ如７〇ｔｏ一ｓＴｍｍＺｍｓｂ、Ｆ渐如ｅｙｅ化ｒｏｆＷｃＭＳ）具有定的抑制效果；利用薄层层析及分子

6、排阻色谱对公．０？如〇的Ｗ；向ｄｅｗＷＢ１褐藻胶裂解酶酶解褐藻胶的终产物进行分化发现其主要为二糖和三糖，相对含量分别为７４．１％和２５．９％；高效凝胶渗透色谱测定酶解终产物褐藻寡糖的平均分子量为５１６Ｄａ。ＷＢ１降解海带中褐藻胶的发酵条件进行了优化，选取８个半固体发酵中（巧对菌株可能影响褐藻胶降解量的因素，即发酵时间，ＮａＣｌ浓度，补充氮源，补充碳源，发酵Ｈ。利，初始ｐ，液料比，接种量，发酵温度用单因素试验确定各因素的最大响应区域在最大响应区域基础上ｃｋｅ－ｒｍａｎ，通过ＰｌａｔＢｕ试验筛选出影响褐藻胶降解量的主要因素ｅｎｔｒ

7、ａｌ为：液料比，补充氮源牛肉膏提取物含量及发酵时间。在ＰＢ试验基础上利用ＣＣｏｍｏ一ｐｓｉｔｅＤｅｓｉｇｎ试验设计及响应面方法进行回归分化求解回归方程得到进步优化－－Ｉ微生物处理海带饲料对刺参生长和免疫的影响的褐藻胶降解条件：发酵时间为Ｈ３．９４ｈ，液料比为４４．８７Ｌ／ｇ，牛肉膏含量化３％，结果思示实际褐藻胶平均蜂解量为％．８８％比条件优化之前最多提高４。，５．１７％（３）通过体外实验研究了３种不同分子量范围的褐藻寡糖（ＡＯＳ）及其相应两种类型的搪酵酸片段（Ｍ段和Ｇ段）对刺参体腔细施非特异免疫应答的促进效果。利用改进后

8、的以１５细胞培养液对刺参