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时间:2019-03-13
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1、宿主限制因子BST-2和乙型肝炎病毒相互作用研究StudiesontheInteractionbetweenHostRestrictionFactorBST-2andHepatitisBVirus作者姓名:张标专业名称:生物医学工程指导教师:周余来教授协助:于晓方教授学位类别:医学硕士答辩日期:2015年5月25日中文摘要宿主限制因子BST-2是一种由干扰素诱导产生的抗病毒糖蛋白,自2008年人们发现BST-2对HIV-1的限制作用以来,BST-2的研究成为了生命科学领域的一大热点。BST-2的主要作用是将包膜病毒截留在感染细胞膜表面抑制病毒的释放。乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝病
2、毒科的一种包膜DNA病毒,在细胞内的多囊泡体进行组装分泌。HBV能引起人类肝脏的急慢性感染和肝脏炎症,发展为肝硬化,同时也是肝细胞癌的一个主要因素。最近有研究报道BST-2还可以影响HIV-1病毒在细胞内部的组装释放,和HBV的组装位置相同,而且BST-2对HBV的释放是否有抑制作用尚不清楚。所以,我们设计实验对BST-2与HBV之间的相互作用进行了研究。通过总结目前的研究进展,本实验的设计主要包括四个方面,第一是BST-2及其突变体对HBV释放的抑制作用,第二是不同细胞中HBV对BST-2的拮抗作用,第三是HBx与BST-2的相互作用,最后还研究了HBx和BST-2对NF-κB
3、信号通路的调节。通过对实验数据的分析,我们得到了一些明确的实验结果。在本研究中,向肝细胞和非肝细胞中转染HBV病毒质粒,通过westernblot检测蛋白表达量,并且通过ELISA检测HBV抗原。结果表明BST-2与HBV的相互作用具有细胞依赖性。在293T细胞中,IFN-α诱导产生的和转染的BST-2对HBV都有很强的抑制作用,但是在Huh-7细胞中,外源的BST-2对HBV的抑制作用较弱。在肝细胞中,通过HIV-1ΔVpu与HBV或者病毒蛋白质粒共转染,并超速离心收集上清中的HIV-1病毒颗粒进行westernblot检测,我们发现HBV和HBx能促进HIV-1ΔVpu的释放
4、,而在非肝细胞中则没有促进释放的现象,而且Vpu不能有效地恢复BST-2对HBV的抑制作用。部分BST-2突变体对HBV和HIV-1的限制作用也不相同。这些结果说明HBV和HIV-1对BST-2的拮抗作用不完全相同。通过向293T细胞共转染HBx和BST-2质粒,使用westernblot检测细胞中蛋白的量,我们观察到BST-2被HBx降解。在质粒共转染后,加入蛋白酶抑制剂,降解作用则受到抑制。在肝细胞中没有观察到降解现象,反而是HBx引起了BST-2在肝细胞内的积聚,总体BST-2的水平升高。这些结果表明HBx和BST-2之间的相互作用也是肝细胞特异性的。之前的研究报道BST-
5、2和HBx能分别激活NF-κIB信号通路,在本研究中,向肝细胞和非肝细胞转染了NF-κB报告质粒,通过检测萤光素酶活性,表明了在肝细胞和非肝细胞中BST-2都能激活NF-κB信号通路,但是在肝细胞中HBx对NF-κB信号通路的激活不明显,在非肝细胞中作用较弱。虽然BST-2抑制HBV释放及其之间相互作用的机制尚不清楚,还需要大量的研究来进一步地阐明,但是我们的研究已经得到了一些初步数据,表明二者之间有一定的联系,这可能会开启宿主细胞抗HBV研究的新领域,为HBV的临床治疗提供新的药物作用靶点。关键词:BST-2,乙型肝炎病毒,HBx,NF-κB,干扰素IIAbstractHost
6、restrictionfactorBST-2isaninterferon-inducibleantiviralglycoprotein.ThestudyofBST-2becomesahotspotofbioscience,sincetherestrictionofBST-2inHIV-1releasingwasdiscoveredin2008.ThemainfunctionofBST-2istetheringtheenvelopedvirusesattheinfectiouscellmembranetoinhibitthereleasing.HepatitisBVirus(HBV
7、)isaenvelopedVirusofhepadnaviridae,assemblesatthemultivesicularbodies(MVBs).HBVcancauseacuteandchronicinfectionandliverinflammation,whichmaybedevelopscirrhosis,andanimportantfactorofhepatocellularcarcinoma(HCC).Inrecentstudy,BST-2canalsoimpac
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