宿主限制因子bst-2和乙型肝炎病毒相互作用研究

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1、宿主限制因子BST-2和乙型肝炎病毒相互作用研究StudiesontheInteractionbetweenHostRestrictionFactorBST-2andHepatitisBVirus作者姓名：张标专业名称：生物医学工程指导教师：周余来教授协助：于晓方教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月25日中文摘要宿主限制因子BST-2是一种由干扰素诱导产生的抗病毒糖蛋白，自2008年人们发现BST-2对HIV-1的限制作用以来，BST-2的研究成为了生命科学领域的一大热点。BST-2的主要作用是将包膜病毒截留在感染细胞膜表面抑制病毒的释放。乙型肝炎病毒（HBV）是嗜肝病

2、毒科的一种包膜DNA病毒，在细胞内的多囊泡体进行组装分泌。HBV能引起人类肝脏的急慢性感染和肝脏炎症，发展为肝硬化，同时也是肝细胞癌的一个主要因素。最近有研究报道BST-2还可以影响HIV-1病毒在细胞内部的组装释放，和HBV的组装位置相同，而且BST-2对HBV的释放是否有抑制作用尚不清楚。所以，我们设计实验对BST-2与HBV之间的相互作用进行了研究。通过总结目前的研究进展，本实验的设计主要包括四个方面，第一是BST-2及其突变体对HBV释放的抑制作用，第二是不同细胞中HBV对BST-2的拮抗作用，第三是HBx与BST-2的相互作用，最后还研究了HBx和BST-2对NF-κB

3、信号通路的调节。通过对实验数据的分析，我们得到了一些明确的实验结果。在本研究中，向肝细胞和非肝细胞中转染HBV病毒质粒，通过westernblot检测蛋白表达量，并且通过ELISA检测HBV抗原。结果表明BST-2与HBV的相互作用具有细胞依赖性。在293T细胞中，IFN-α诱导产生的和转染的BST-2对HBV都有很强的抑制作用，但是在Huh-7细胞中，外源的BST-2对HBV的抑制作用较弱。在肝细胞中，通过HIV-1ΔVpu与HBV或者病毒蛋白质粒共转染，并超速离心收集上清中的HIV-1病毒颗粒进行westernblot检测，我们发现HBV和HBx能促进HIV-1ΔVpu的释放

4、，而在非肝细胞中则没有促进释放的现象，而且Vpu不能有效地恢复BST-2对HBV的抑制作用。部分BST-2突变体对HBV和HIV-1的限制作用也不相同。这些结果说明HBV和HIV-1对BST-2的拮抗作用不完全相同。通过向293T细胞共转染HBx和BST-2质粒，使用westernblot检测细胞中蛋白的量，我们观察到BST-2被HBx降解。在质粒共转染后，加入蛋白酶抑制剂，降解作用则受到抑制。在肝细胞中没有观察到降解现象，反而是HBx引起了BST-2在肝细胞内的积聚，总体BST-2的水平升高。这些结果表明HBx和BST-2之间的相互作用也是肝细胞特异性的。之前的研究报道BST-

5、2和HBx能分别激活NF-κIB信号通路，在本研究中，向肝细胞和非肝细胞转染了NF-κB报告质粒,通过检测萤光素酶活性，表明了在肝细胞和非肝细胞中BST-2都能激活NF-κB信号通路，但是在肝细胞中HBx对NF-κB信号通路的激活不明显，在非肝细胞中作用较弱。虽然BST-2抑制HBV释放及其之间相互作用的机制尚不清楚，还需要大量的研究来进一步地阐明，但是我们的研究已经得到了一些初步数据，表明二者之间有一定的联系，这可能会开启宿主细胞抗HBV研究的新领域，为HBV的临床治疗提供新的药物作用靶点。关键词：BST-2，乙型肝炎病毒，HBx，NF-κB，干扰素IIAbstractHost

6、restrictionfactorBST-2isaninterferon-inducibleantiviralglycoprotein.ThestudyofBST-2becomesahotspotofbioscience,sincetherestrictionofBST-2inHIV-1releasingwasdiscoveredin2008.ThemainfunctionofBST-2istetheringtheenvelopedvirusesattheinfectiouscellmembranetoinhibitthereleasing.HepatitisBVirus(HBV

7、)isaenvelopedVirusofhepadnaviridae，assemblesatthemultivesicularbodies(MVBs).HBVcancauseacuteandchronicinfectionandliverinflammation,whichmaybedevelopscirrhosis,andanimportantfactorofhepatocellularcarcinoma(HCC).Inrecentstudy,BST-2canalsoimpac