牛病毒性腹泻病毒与宿主细胞的相互作用研究

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1、牛病毒性腹泻病毒与宿主细胞的相互作用研究牛病毒性腹泻病毒与宿主细胞的相互作用研究　牛病毒性腹泻病（Ｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌｄｉａｒｒｈｅａ，ＢＶＤ）是由牛病毒性腹泻病毒（Ｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓ，ＢＶＤＶ）引起的一种以感染牛为主的疾病，该病呈世界性.L.分布，属于黄病毒科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）瘟病毒属（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）［１］。ＢＶＤＶ感染动物机体后，可以引起动物的生殖系统、呼吸系统、胃肠系统、血液循环、免疫系统、淋巴细胞、肌肉与骨骼系统、皮肤、中枢神经等诸多系统产生相应的病理学变化［２］。由于该病分布广泛，存在于大多数养牛业发达的

2、国家，给世界养牛业造成了巨大的损失［３］。所以尽快研究清楚牛病毒性腹泻病的致病机理，为研制出更加安全、可靠、有效的疫苗，以控制该病的发生和蔓延尤为重要。本研究主要就ＢＶＤＶ的病原学特性、生物学特性以及细胞生物学，尤其是病毒感染后对宿主细胞和免疫相关细胞因子的表达影响做一概述。　　１ＢＶＤＶ的病原学特性　　１．１ＢＶＤＶ概述　　ＢＶＤＶ是黄病毒科瘟病毒属的代表种。病毒粒子略呈圆形，但也常呈变形性。有囊膜，病毒表面有明显的纤突。病毒粒子直径５０～８０ｎｍ。ＲＮＡ核心直径为２０ｎｍ±４ｎｍ。病毒在细胞浆内复制，以出芽方式成熟。病毒核酸为线性单股正链ＲＮＡ。

3、ＢＶＤＶⅠ型基因组全长为１２５７３ｎｔ，ＢＶＤＶⅡ型基因组全长为１２２５５ｎｔ，（Ｇ＋Ｃ）ｍｏｌ％都为４５，编码区占９５％。病毒基因组只有一个开放阅读框架（Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），编码一个由近４０００个氨基酸组成的多聚蛋白，多聚蛋白由细胞和病毒基因编码的蛋白酶在翻译的同时或翻译后加工，至少生成１１种成熟的蛋白质，编码这11种蛋白质的基因在基因组中的相对位置为５′-Ｎｐｒｏ（Ｐ２０）-Ｃ（Ｐ１４）-Ｅ０（ｇＰ４８）-Ｅ１（ｇＰ２５）-Ｅ２（ｇＰ５３Ｐ７-ＮＳ２-３（Ｐ１２５）-ＮＳ４Ａ（Ｐ１０）-ＮＳ４Ｂ（Ｐ３０）-ＮＳ５Ａ（Ｐ５８）

4、-ＮＳ５Ｂ（Ｐ７５）-３′［４］。病毒粒子分子质量为６０１０６ｕ，在蔗糖中的浮密度为１．１２～１．１３ｇ／ｃｍ３，沉降系数Ｓ２０ｗ为１４０［５］。　　１．２ＢＶＤＶ的培养特性　　牛病毒性腹泻病毒可用胎牛肾脏细胞、脾细胞、睾丸细胞、肌肉细胞、鼻甲骨细胞，气管、肺、皮肤等组织细胞进行培养。常用的是胎牛肾、鼻甲原代细胞或二倍体细胞［６］。由于在白细胞、血小板、上皮细胞和成纤维细胞等细胞表面存在该病毒的受体ＣＤ４６，因此病毒主要通过黏膜（口腔、鼻、消化道和生殖道）侵入宿主体内，再经血液或淋巴液分布到全身组织器官［５］。　　２ＢＶＤＶ的生物学特性　　２．１ＢＶＤ

5、Ｖ的基因型特性　　根据病毒基因组５′非翻译区（５′－ＵＴＲ）的序列将ＢＶＤＶ分成Ⅰ、Ⅱ两个基［７］，Ⅰ型还可进一步分为ＢＶＤＶ－１ａ、ＢＶＤＶ－１ｋ［８，９］。Ｊａｃｋｏｖａ等［１０］将ＢＶＤＶⅠ型划分为１３种亚型即Ⅰａ~Ⅰｍ，Ｍａｋｏｔｏ等［１１］分离到不同于已报道的ＢＶＤＶ－Ⅰ型的2种新亚型Ⅰｎ和Ⅰｏ。Ｇｉａｎｇａｓｐｅｒｏ等［１２］根据ＢＶＤＶ－Ⅱ型５′-ＮＴＲ二级结构差异将ＢＶＤＶ－Ⅱ划分为ＢＶＤV－Ⅱａ、ＢＶＤＶ－Ⅱｂ、ＢＶＤＶ－Ⅱｃ和ＢＶＤＶ－Ⅱｄ４个亚型；由于ＲＮＡ病毒的高突变性以及国际交流的日渐频繁，一定地区的Ｂ

6、ＶＤＶ基因新亚型还在不断变化［１３］。因此，ＢＶＤＶ基因亚型的研究对流行病学研究颇有裨益。在自然感染中基因Ⅰ型（６１％）比基因Ⅱ型（３２％）更为流行，且Ⅰｂ比Ⅰａ更为流行［１４］。ＢＶＤＶ－Ⅰ普遍用于疫苗生产、诊断和研究，而ＢＶＤＶ－Ⅱ５′－ＵＴＲ区缺乏ＰｓｔⅠ位点，且中和活性也不同于ＢＶＤＶ－Ⅰ，在持续感染（ＰＩ）牛、死于出血性综合征的急性ＢＶＤ牛中主要分离到ＢＶＤＶ－Ⅱ［１５］。　　２．２ＢＶＤＶ的生物型特性　　根据ＢＶＤＶ是否产生细胞病变（ＣＰＥ）的生物学特性，把该病毒株分为非致细胞病变型（Ｎｏｎｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ，ＮＣＰ）和致细胞病变

7、型（Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ，ＣＰ）［１６，１７］。致细胞病变型的出现是由病毒遗传物质的改变造成的，有插入、重复或重排等变化，发生于非结构蛋白ＮＳ２／３的基因编码区。非致细胞病变型的毒株可用于干扰作用，或鸡新城疫病毒强化试验及免疫荧光试验［６］。Ｒｉｄｐａｔｈ等［１８］通过建立牛淋巴样细胞系作为体外研究模型，并根据接种到淋巴样细胞和上皮细胞后的培养特征将ＢＶＤＶ分为３个生物型，即非致细胞病变型、致淋巴细胞病变型和致细胞病变型。笔者认为，目前针对ＢＶＤＶ的生物型划分概念应当更加严格地加以限定，它虽然在一定程度上反映了ＢＶＤＶ与宿主细胞，特别是与上皮细胞之间的关系

8、，但不能明