流感病毒与宿主细胞因子的相互作用和抗流感病毒化合物的筛选

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1、中国科学院大学UniversityofChineseAcademyofSciences硕士学位论文二。一三年五月IIlllIlllIlllIIllIIY2381716r⋯●■●■●』●●1l·～一lneInteraCtlonDe佩reenlnIlUenZaVlrUSandnostcellIaCtorSBy"白nbinLaiADissertationSubmittedtoTheUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequ

2、irementForthedegreeofMasterofBiochemistryandMolecularBiologyInstituteofMicrobiologyChineseAcademyofSciencesMay,2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文不包含任何其他个人或集体己经发表或未发表的成果、数据或撰写过的科研成果，也不包含为获得任何教育机构的学位或证书已使用过的材料。对本论文所涉及的

3、研究工作做出贡献的其他个人和集体，均己在文中以明确方式标明。申请学位的论文与资料若有不实之处，本人愿承担一切责任。学位论文作者签名：懈"Iml、年r月学位论文使用授权声明77日l本人完全了解中国科学院大学及微生物研究所关于提交、保存和使用学位论文的规定。同意研究所保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸制版和电子版，允许论文被查阅和借阅；论文保存单位及借阅人有义务保护论文作者及单位的知识产权。本论文的成果归中国科学院微生物研究所所有；本人离所后发表、使用本学位论文或与本论文直接相关的学术成果时，第一署名单

4、位仍然为中国科学院微生物研究所。(保密论文在解密后遵守此规定)作者签名：导师签名：嚣详；岩琴昌日期：认c’年r月哆日摘要流感病毒与宿主细胞因子的相互作用和抗流感病毒化合物的筛选赖文彬(生物化学与分子生物学)指导教师：叶听研究员流感病毒是属于正粘病毒科的负链RNA病毒。流感病毒大流行会给人类生命健康造成严重威胁。通过研究流感病毒与宿主细胞因子间的相互作用可以加深对流感病毒的认识，也可以为抗流感药物的开发提供新靶点。目前以达菲为代表的抗流感药物面临严重的耐药性问题，筛选新型的流感病毒抑制剂具有重要意义。流感

5、病毒转录需要摘取宿主细胞mRNA的帽子结构作为引物来起始。DSIF和NELF是RNA聚合酶polII的转录延伸调节因子，可以使polII停滞在基因的启动子区，推测这个过程有利于病毒聚合酶摘取帽子结构。染色质免疫沉淀实验证明流感病毒感染后DSIF和NELF在看家基因的启动子区结合增强。将细胞中的DSIF敲低后，流感病毒的复制受到抑制，说明DSIF和NELF能够辅助流感病毒复制。宿主细胞MicroRNA能够调控病毒的复制过程。通过比较流感病毒复制差异明显的细胞系中MicroRNA表达谱，利用双荧光报告系统筛

6、选出了可能与流感病毒M片段具有相互作用的MicroRNAMir-33a。Mir-33a能抑制流感病毒的复制，与M片段相互作用位点定位在57端1-340区域。同时也筛选出了能够间接抑制流感病毒的Mir-21，Mir-27a和Mir一194。利用流感病毒启动子报告细胞株HeLa-IAV-Luc从微生物代谢产物化合库中筛选出了能够抑制流感病毒的化合物Colletodiol。Colletodiol对血凝素蛋白(hema991utinin，HA)功能没有影响，能够抑制流感病毒RNA聚合酶的活性，导致病毒RNA合成

7、受到抑制。关键词：流感病毒，DSIF，NELF，Mir-33a，HeLa-IAV-Luc细胞株，Colletodiol，流感病毒RNA聚合酶ABSTRACTTheinteractionbetweeninfluenzavirusandhostcellfactorsandscreeningofinfluenzavirusinhibitorsWenbinLai(Biochemistryandmolecularbiology)DirectedbyDr．XinYeAbstractInfluenzavirusbel

8、ongstoOrthomyxoviridaewithagenomecomposedofsegmentedminusRNAs．Pandemicofinfluenzavirusisaseverethreattohumanhealth．Investigationoftheinteractionbetweeninfluenzavirusandhostcellfactorscanfacilitateourunderstandingofthevirus