大鼠心肌缺血再灌注损伤病理机制及stvna保护作用的蛋白质组学研究

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1、硕士学位论文大鼠全肌缺血再灌注损伤適理机制及STVNa保护作用的蛋白质组学研究作者姓名袁琪学科专业生物制药指导教师吴晓英副教授所在学院生物科学与工程学院论文提交日期2015年6月MechanismStudyofIschemiaReperfusionInjuryandProtectiveEffectsofSTVNainRatHeartsbyProteomicAnalysisADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate:YuanQiSupervisor:AssociateProfessorWuXiaoyingSou

2、thChinaUniversityofTechnologyGuangzhou,China分类号：Q-51学校代号：10561学号：201220124037华南理工大学硕士学位论文大鼠心肌缺血再灌注损伤病理机制及STVNa保护作用的蛋白质组学研究作者姓名：袁琪指导教师姓名、职称：吴晓英副教授申请学位级别：硕士学科专业名称：生物制药（千人班）研究方向：基于质谱的蛋白质组学方法研究及在创新医药研发中的应用论文提交日期：2015年6月10日论文答辩日期：2015年5月31日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：吴传斌教授委员：吴传斌教授、魏坤教授

3、、金亚副研究员、叶燕锐副教授和权磊副教授华南理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：f嗔日期：年6月

4、中日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，艮研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华南理工大学。学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，

5、允许学位论文被查阅（除在保密期内的保密论文外）；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。本学位论文属于：□保密，在____年解密后适用本授权书。X7&保密，同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览；同意将本人学位论文提交中国学术期刊(光盘版)电子杂志社全文出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，传播学位论文的全部或部分内容。(请在以上相应方框内打“V”）作者签名：日期：指导教师签名：日期：平6目1士@摘要心血管疾病是造成全球死亡率居高不下的首要因素，缺血再

6、灌注损伤作为急性心肌梗死的主要原因被广泛关注。探讨心肌缺血再灌注损伤的病理机制，寻找有效的药物作用靶点，蛋白质组学研究尤为重要。本文以差异蛋白组学方法对SpragueDawley（SD）大鼠在体心肌缺血再灌注损伤的病理机制及异甜菊醇钠（STVNa）的心肌保护作用进行了研究，提出了缺血及再灌注损伤导致能量代谢通路变化及STVNa保护作用来自提升脂肪酸代谢水平的初步结论。具体来说，首先成功构建了如下三组模型：（1）心肌缺血模型（结扎左冠状动脉前降支30分钟，生物学重复样品数n=3），（2）缺血再灌注模型（缺血30分钟，去结扎再灌注120分钟，n=3），（3）STVNa后处

7、理模型（去结扎再灌注同时颈静脉给予STVNa120分钟，n=3）。为克服个体差异，蛋白组学分析的样品取材采用了自身对照的方法，即切取每只大鼠心脏的正常区域与缺血区域进行对比。对所得心脏组织的蛋白组学分析采用基于非变性一维凝胶电泳（one-dimensionalgelelectrophoresis,1DE）凝胶胶条网格切取定量液相色谱串联质谱联用（liquidchromatrography-tandemmassspectrometry,LC-MS/MS）的策略：提取组织水溶性蛋白，以非变性1DE分离后，对1DE凝胶胶条（1.1mm宽×42-44mm高×1mm厚）进行

8、网格式的切取，即在全长（分子量）范围内无差别地均匀划分为相同尺寸的凝胶方块（1.1mm宽×1.1mm高）（对每块凝胶均选取两条胶条平行处理，即分析重复样品数n=2）；各凝胶方块均以标准化程序进行胶内酶解、肽段提取和非标记定量标准品添加等处理；所得各凝胶方块对应的肽段样品以LC-MS/MS进行鉴定及非标定量；汇总各凝胶方块所含蛋白质种类及含量，重构1DE胶条上各蛋白的总量及（沿表观分子量的）含量分布。每个组学样品检测到的蛋白质种类为1300-1900种，含量范围跨越5个数量级，且各蛋白均对应其特异性的含量分布（非变性蛋白质谱图）。组学数据的处理依次为：