叶酸对中期草鱼生长和肠道免疫的影响及其调控机制研究

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1、ｒ＇Ｓ９６５分类ｊ．１１２．Ｓ８１６．１ＬＳ９４２．１学号Ｓ２０１２＾４９四川农业大学．．．ｔ一，店一硕±学位论义叶酸对中期草鱼生长和肠道免疫的影响＾及其调控帆制研究一＂石磊指导教师冯琳研究员周小秋教授学科专业动物营养与饲料科学？研巧方向水生动物营养早２０１５年６月ＶＣ，？－．－ＶＭ？Ｖ；，；－．Ｉ本研究由国家公益性行业（农业）科研专项（２０１００３０２０）国家重点基础研究发展计划（９７３项目）（２０１４ＣＢ１３８６００）资助特致谢意！论文独创性

2、声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，学位论文中不包含，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机一构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：＾＾＞少年７月４日关于论文使用授巧的声明、本人完全了解四川农业大学有关保留使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可采用影印、缩印或扫描

3、等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。ｙ本论文不保密。。本论文保密，解密后适用本授权。在＿年＿＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）研究生签名：＾＾亦咬年７月午日导师签名：皆味年７月曰乎１Ｊ四川农业大学硕ｄｒ学位论文摘要摘要本试验旨在研究饲粮添加不同水平叶酸对生长中期草鱼生长性能、肠道免疫能力、紧密连接和抗氧化能力的影响及其作用机制。将初始体重为２６７．６９±＾８７ｇ的体８个格均匀、健康的草鱼随机分配到１网箱中，设置６个叶酸水平，各组间初始体重差异不显著（戶＞化０５），进行

4、８周的动物实验，实验期间各处理分别投喂叶酸含量为００、０．４、１．０３、１．４８、１．８８３．１２ｍ／ｋ．１（对照组）７和ｇｇ的饲粮。本研％结果显示：饲粮中适宜水平的叶酸显著提高中期草鱼的末重、増重百分比＜（ＰＷＧ）、特异性増长率、摄食量和饲料效率（户化０５）。适宜水平叶酸显著提高草＋＋鱼肠道膜蛋白酶Ｋ－、糜蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性、Ｎａ／ＡＴＰ酶、碱性磯酸酶、（ＣＫ）和－（尸＜０肌酸激酶Ｙ谷氨酌转移酶活性．０５），同时，适宜水平叶酸上调前肠、＋＋ＣＫａ／Ｋ－ｓｅ＜中肠和后肠和ＮＡＴＰａａｌｐｈａｓｕｂｕｎｉｔｉｓｏｆｏｒｍ１基因

5、表达（戶０．０５），但是＋＋＞一／Ｋ－ＡＴＰａｓｅａｌｈａｓｕｂｕｎｉｔｉｓｏｆｏｒｍ８０５。对肠道Ｎａｐ基因表达无影响（戶０．）进步研究发现，适宜水平叶酸上调肠道雷帕霉素祀蛋白和Ｓ６蛋白激酶１基因表达，但是下调草鱼肠道ｅＩＦ４Ｅ结合蛋白基因表达（戶＜化０５）。此外，适宜水平叶酸显著增加草鱼肠道酸性磯酸酶和溶茵酶活性！＾及补体Ｃ３的含量；显著下调草鱼肠道促炎细胞因子白介素１、白介素８、肿瘤坏死因子（Ｘ、信号分子核因子ＫＢｐ６５、ＩｋＢ激酶（ＩＫＫ）ａ、０ＫＫ－Ｉ－＜显著上调肠道抗炎细胞因子白介素Ｉｐ和ＫＫ丫的基因表达（戶化０５）；１０、转化生

6、长因子和核因子浊抑制蛋白（１浊）的基因表达（Ｐ＜＾０５）。同时，适宜水平叶Ｐｃｃ－－酸显著上调ｏｌｕｄｉｎ、ＺＯ１和ｃｌａｕｄｉｎｂ在草鱼肠道的基因表达（Ｐ＜化０５），显著下－调ｄａｕｄｉｎ１５、肌球蛋白轻链激酶和ｐ３８丝裂原活化蛋白激酶在草鱼肠道的基因表达＜０（戶．０５）。同时本试验研究发现，适宜水平叶酸降低草鱼肠道的氧自由基、丙二酸和蛋白叛基的含量（？＜化〇５），显著増加肠道还原型谷腕甘肤的含量レッ及铜辟超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）、过氧化氨酶（ＣＡＴ）、谷脫甘狀过氧化物酶（ＧＰｘ）、谷腕甘狀硫转移酶（ＧＳＴ）和谷腕甘狀还原酶（ＧＲ）的活性，显著降

7、低肠道儘超氧化物歧ＭｎＳＯＤ＜一化酶（）活性（Ｐ０．０５）。进步研究发现，适宜水平叶酸显著上调草鱼肠道Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ、ＣＡＴ、ＧＰｘ、ＧＳＴ、ＧＲ和核因子相关因子２基因表达，下调肠道ＭｎＳＯＤ、Ｋｅｌｃｈ样ＥＣＨ联合蛋白ｌａ（Ｋｅａｐｌａ）和Ｋｅａｐ化基因表达（Ｐ＜０．０５）。在本试验条－件下，ＷＰＷＧ为标化确定中期草鱼（２６７７４７ｇ）饲粮的叶酸需要量为１．６０ｍ／ｋｇｇ饲粮。关键词，：草鱼，叶酸消化吸收能为，免疫力