体外兔软骨细胞的分离，培养与鉴定的研究

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1、１囚专业学位口单位代码：０４７２学术学位１２０４００９民６８４学号：密级：公开；中图分类号１＾＞斬爲缘愈硕±学位论文体外兔软骨细胞的分离，培养与鉴定的研究Ｓｅａｒａｔｉｏｎｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔ打ｃａｔｉｏｎｏｆｒａｂｂｉｔｃｈｏｎｄｒｏｃｔｅｐ，ｙｉｎｖｉｔｒｏ作者结名：王林林导师猎名：董玉珍学科口类：临床医学专业名称：骨外科学培养院系一；新乡医学院第附属医院完成时间二〇—五年兰月：Ｓｅａｒａｔｉｏｎｃｕｌｔｉｖａ村ｏｎａｎｄｉｄ

2、ｅｎｔｉｌｃａｄｏｎｏｆｒａｂｂｉｔｐ，ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｉｎｖｉｔｒｏＡ？＊ＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄ化Ｉ化ｅＤｅｇｉｅｅｏｆＭａｓ化ｒＣａｎｄｉｄａｔｅ：Ｓｕｅｒｖｉｓｏｒ：ｐＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅＸｉｎｘｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙ新乡医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加Ｗ标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集

3、体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。ｏ作者签名：日期；＞年ｒ月日／ｒｊｊ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权新乡医学院可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＂＂本学位论文属于（请在下相应方框内

4、打Ｖ）：１．保密□，在＿年解密后适用本授权书。２．不保密材二作者签名；砍日期年ｒ月ｐ曰本泮ｊ／导师签名：曰期：年ｒ月？口曰玉目录摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３刖胃５材料和方法６结果８ｉｔｉｆｅ１０结论１５附１６Ｓ参考鏡１９综述：软骨移植在治疗骨性关节炎软骨损伤中的临床分析２２附录３８攻读学位期间发表文章情况巧＾Ｍ４０个人简Ｍ４１新乡医学院硕±学位论文体外兔软骨细胞的分离，培养与鉴定的研究摘要背呆骨

5、性关节炎是一种Ｗ关节软骨退行性变和继发性骨质增生为特性的慢性关节疾病，因关节软骨退化损伤导致关节边缘和软骨下晉反应性増生所致。是临床上多发的老年退行性疾病。随着我国的老龄化，骨性关节炎的发病率越来越高，该病造成的疼１［］痛及活动不便严重影响老人们的生活作息。现今对该病的治疗仍然缺乏特效药，软骨的破坏过程中可能影响到软骨细胞，而导致软骨细胞分泌炎性细胞因子。研究表明再生软骨细胞移植能有效的解决软骨损伤，根治骨性关节炎。Ｗ前的传统方法较复杂繁琐，引，且容易污染起软骨细胞死亡、降低成活率和质量，因此寻找简单

6、体外培养软骨细胞的方法对骨性关节炎的治疗非常重要。故本研究的目的是探讨体外软骨细胞的分离培养方法，Ｗ获取大量分裂活跃具有高活力的软骨细胞，修复软晉缺损，为软音细胞成功移植、治愈骨关节炎提供理论基础。目的：在体外对兔软骨细胞的分离、培养Ｗ及试验鉴定，在体外建立软骨细胞培养的体系培养出大量纯度高活性高的软骨细胞一。为下步的人工软骨再造及软骨移植奠，定基础的理论研究。方法耳缘静脉麻醉新西兰大白兔，在兔子胸口解创，暴露出必脏动脉，最大量取血，应用离必机制备高浓度血小板血浆，冰箱内封存，并防止污染，Ｗ备

7、后期应用；无菌操作取出兔膝关节软骨，在超净台上分离关节组织，提取软骨组织，将其剪成１１１１１１１＞＜１１１１【１１大小碎片，放入２〇１１１１小烧杯中，？８８稱酸缓冲溶液冲洗３次，加入质量分数为化１％的石二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）５ｍｌ置于常温下静止２０分钟后离也弃上清，加入相当３倍体积的０．２５％膜蛋白酶，放置３７。直温振荡器内消化４０ｍｉｎ，捏轻吹打弃去上清液，ＰＢＳ冲洗２次：，按照１１比例加入质量分数为化２％ＩＩ型胶原酶和质°°量分数为０．２５％膜蛋白酶各５ｍｌ置于３７Ｃ恒温振荡器内消化２０

8、ｍｉｎ４Ｃ低温高速离，°－ｉ屯（ｌＯＯＯｒｍｉｎ）５ｍｉｎ，离也后弃上清，加入６ｍｌ含０．２％１１型胶原酶消化液置于３７Ｃ恒温振荡器内进行消化，每９０分钟取上清１次，剩余烧杯内更换消化液继续消化，取含体积分数为１０％胎牛血清（ＦＢＳ）的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基于上清液中