成年兔关节软骨创伤模型中软骨细胞的分离及体外培养观察

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1、!"’MTX;P‘Y]2KTQYP2a3[1]2a#""%，_’&-#郝鹏!，李胜富#，裴福兴!!，龙丹

2、#!，()*+%&’$,-#，$.)/-$01&’!!，%234)!"#$%&’（四川大学华西医院!)骨科；#)移植免疫实验室，四川成都*!""+!）（!)!"#$%&’"(&)*+%&,)#"-./01%2"%3，#)4$5)*6%$(7#8$(&9(2.(""%.(2$(-:’’1()8)23，;"7&<,.($=)7#.&$8，0./,1$(>(.?"%7.&3，<,"(2-10./,1$(*!""+!，<,.($）摘要：目的：观察成年兔关节软骨损伤模型中能获得的关节软骨和软骨细胞数量，探讨不同浓度的!型胶原酶在不同时间段分离软骨细胞的能力及体外培

3、养所获得的软骨细胞的生物学活性。方法：建立成年兔关节软骨损伤模型，用")!,-")#,!型胶原酶消化+小时，每小时收集消化下来的兔膝关节软骨细胞，计数细胞收获率和细胞存活率。体外培养原代及传代细胞，观察细胞形态和生长规律，绘制生长曲线，检测细胞合成"、!型胶原、蛋白多糖能力。结果：成年兔膝关节软骨细胞的收获率平均为(*"()*.!"+个/克，细胞存活率平均为&%)(,，胶原酶浓度与细胞的获取率无显著关系，但与细胞的存活率相关，在消化时间超过(0后细胞的存活率显著降低，在培养过程中出现易老化现象，原代细胞贴壁时间为+’-%#0，甲苯胺蓝异染反应较强，!型胶

4、原免疫组化染色反应呈强阳性，"型胶原免疫组化染色为阴性，传(代细胞形态由卵圆形、多角形变为梭形，甲苯胺蓝染色异染反应较弱，免疫组化"型胶原为强阳性而!型胶原表达极弱。结论：")!-")#,!型胶原酶消化、分批收取细胞具有较高的细胞收获率和存活率，体外培养时，从创伤后关节软骨中获得的原代细胞和!代细胞具有良好的软骨表型，第(代及以后的细胞生物学活性低下。关键词：软骨细胞；胶原酶；软骨创伤；细胞培养；成年兔［中图分类号］1*’!)(［文献标志码］225"&-%.&：3456789:6：;<6:=>?=86806@?=A898B=D7=D89

5、>=E6=AF70=89=89AECD8D=4498IH=D7=D89>=E6=AF8066CC9796A7B=D7=D89>=E6J980F9CC6D6A87>=E6A=H6H!9AF9CC6D6A8F9E6H89:689I6，=AF8<<4H6D:680649<>70=D=786D9H897H

6、D9AE7?>89:=898D=4498I=D7=D89>=E6J6D66H8=4>9H06F);067=D89>=E6J6D6F9E6H86F4B")!,>=E6A=H6!C>0=D:6H89AED=86H，:9=49>98B8?D6F70>ED<

7、J807?D:6H=AFHBA806H9H>=E6A8BG6$"，!，GD<86?=868066CC678H>=E6A=H678H：3A=:6D=E6，8060=D:6H8D=8698BD=86>HJ=H&%)(,);067>=E6A=H60=:6A

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