以hbc为载体美洲型prrsv颗粒候选疫苗构建及免疫原性分析

《以hbc为载体美洲型prrsv颗粒候选疫苗构建及免疫原性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：S852.6单位代码：10193密级：公开学号：2012631硕士学位论文以HBc为载体美洲型PRRSV颗粒候选疫苗构建及免疫原性分析ConstructionandImmunogenicityAnalysisofAmericanTypePRRSVCandidateVaccineBasedonHepatitisBVirusCoreProtein作者姓名：辛舒学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物疫病病原学指导教师：金宁一研究员所在学院：动物科技学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文

2、是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成

3、果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日吉林农

4、业大学硕士学位论文摘要目前，猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）在全球范围内流行，基因型表现出高度可变性，对疾病的防控产生了巨大的阻碍。现阶段对PRRS的防控主要采取疫苗接种的方式，但存在一定的局限性，现有疫苗不能对猪群提供全面持久的保护，因此积极发展新型疫苗对控制PRRSV感染与流行有着重要的意义。自成功采用乙肝病毒核心蛋白（HBc）作为疫苗载体表达了口蹄疫病毒抗原表位以来，HBc被越来越多的应用于病毒样颗粒（VLPs）疫苗的研制。作为VLPs疫苗载体，HBc具有以下特点：天然条件下能够自我组装成颗粒样结构，插入位点灵活，装

5、配效率高（>95%），可以提呈抗原，能够在多种表达系统中稳定表达等。本研究以HBc为载体表达PRRSVGP5保护性抗原，构建了HBc-GP5表位VLPs候选疫苗，并对其进行小鼠免疫评价。首先根据Escherichiacoli(strainK12)密码子偏好性对HBc序列进行密码子优化，并将其克隆至改造的pET-28a原核表达载体中，获得重组质粒pEO-NEW。经SDS-PAGE、Westernblot及透射电镜等方法对表达获得的VLPs进行鉴定，结果表明成功诱导表达了HBc蛋白且表达后蛋白能够自主装配成VLPs，为下一步

6、重组疫苗制备提供研究基础。基于所得到的pEO-NEW表达载体，将优化后的GP5基因插入至pEO-NEW载体的免疫显性区（MIR），获得重组质粒pEO-LEORF。通过SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定重组目的蛋白，结果显示，成功诱导表达GP5蛋白。经透射电镜对其形态进行观察，结果显示，诱导后的重组蛋白能够自主装配成VLPs。以小鼠为模型分析该HBc-GP5VLPs候选疫苗的免疫原性，利用ELISA进行抗体检测，结果表明其能够诱导机体产生较高的特异抗体水平；对T细胞亚群及细胞因子进行检测结果表明，疫苗免疫组小

7、鼠CD3+CD4+T细胞淋巴细胞亚型数量及IL-4水平显著高于对照组（P<0.05），淋巴细胞刺激指数（SI）及第三次免疫后IFN-γ含量与对照组相比显著提高(P<0.05)，说明HBc-GP5表位VLPs候选疫苗能够模拟病毒样颗粒，有效提呈GP5并诱导机体产生体液和细胞免疫，为下一步实验研究提供数据基础。关键词：乙肝核心蛋白；疫苗载体；猪繁殖与呼吸综合征病毒；GP5抗原表位；新型疫苗I吉林农业大学硕士学位论文AbstractAtpresent,PRRSisprevailingallovertheworld,andthe

8、virusshowshighheterogeneity,imposingagreatbarrieronpreventingandcontrollingdisease.Atthisstage,vaccinationisthemostimportantmeasureforpreventingPRRS,butithasit