acta缺失型李斯特细菌载体hiv疫苗的构建及免疫原性研究

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1、符号说明X第一章引言第一章引言第一节艾滋病疫苗研究进展1．1．1研制艾滋病疫苗的迫切性、必要性获得性免疫缺陷综合症(AcquiredImmunodeficiencySyndrome，AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)感染引起的传染性疾病，简称艾滋病。自1981年发现第一例病例以来⋯，艾滋病以惊人的速度在全球蔓延，成为危害人类生命健康最为严重的病毒性疾病之一。近年来，艾滋疫情上升趋势有所减缓，死亡率有所下降，但流行态势仍很复杂，疫情正由高危人

2、群向普通人群缓慢扩散，形势仍是严峻。截至2009年底，全球尚存活的HIV感染者已经达3330万，其中2010年新发HIV感染者约有260万，因艾滋病死亡的约180万人。截至2011年底，估计中国存活艾滋病病毒感染者和艾滋病病人78万人，2011年当年新发感染者4．8万人。目前，艾滋病预防工作主要是进行社会行为和生物医学干预，前者包括普及艾滋病基本知识、推广安全套的使用、以及吸毒人群的针具交换等；后者主要是在易感人群中广泛接种艾滋疫苗。只有采取这种双重策略，才能最终控制艾滋病，放弃或忽视任一策略都将

3、延缓艾滋病的控制。从控制天花、脊髓灰质炎、麻疹、肝炎等成功案例可看出，控制疾病流行最经济有效的方法就是应用疫苗。因此，研制安全、有效的艾滋病疫苗是科研者的奋斗目标。1．1．2候选艾滋病疫苗的种类及策略目前，各国工作者对研究艾滋病预防疫苗己达成共识：有效的疫苗必须能诱导机体同时产生HIV特异性的CD8+细胞毒T淋巴细胞反应(CTL)和中和抗体反应。但单一疫苗难以实现这一目标，需要不同类型的疫苗联合免疫才能提高艾滋病疫苗的免疫效果。可供选择的HIV疫苗包括下列几种：传统疫苗、合成肽和蛋白亚单位疫苗、D

4、NA疫苗以及活载体疫苗。第一章引言1．1．2．1传统疫苗传统疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗，灭活病毒可以预防发病，但不能预防感染。早期的疫苗研究主要时在猴体模型中使用灭活的SW，实验结果发现可以预防一定的病毒感染。此技术线路显示了对低剂量的同源SW毒株攻击产生的保护效果。总体上，末次免疫后达12个月进行病毒攻击可以获得最好的免疫效果，进一步为评价该类疫苗奠定了基础窿1。然而，其它研究表明，如果病毒通过粘膜途径或使用异源性病毒株攻毒，灭活疫苗不能为感染和发病提供保护b1。使用灭活的HIV．2毒株免疫恒

5、河猴，之后使用低剂量(10．40感染性颗粒)的同型病毒进行攻毒，也可获得保护性免疫H3。但是采用用异源HIV．2毒株攻毒则没有进行评价。最近有研究表明，使用低剂量福尔马林处理热灭活HIV．1病毒获得的疫苗，可在小鼠和非人灵长类动物体内不仅可诱导产生针对同源HW毒株的中和抗体，还可诱导针对异源HIV毒株的中和抗体∞3。其它灭活HIV病毒的方法包括使用引起病毒核酸的交叉嵌入的补骨脂素psoralen和联硫基-ntt啶aldrithi01．2。但是，对HIV使用灭活疫苗在目前看来仍然很遥远。几年前有科学

6、研究者发现，采用自然减毒的SIV毒株(SIV瑚。1A11)免疫成年恒河猴和新生恒河猴，之后再进行病毒攻击，结果显示不可以抵挡感染，但是可预防发病。此外，之前感染过SHlV89．6的恒河猴可抵抗有毒力SⅣ僦239毒株的攻击陋1。在此研究中，相比较中和抗体，交叉性细胞免疫反应应答似乎发挥了更重要的作用。另一个减毒策略是采用缺失nef基因的SIV减毒重组株，结果猴子没有发病，而且能够诱导产生特异性的高滴度抗体盯1。T细胞免疫效应的结果则没有报道。免疫后使用高达1000倍猴体感染剂量的野毒株攻毒，猴体仍然

7、可以抵抗感染【71。采用减毒活病毒作为疫苗面临很大的挑战，如咒∥缺失毒株经直肠接种会促进发病。而且，一些成年动物在接种减毒活病毒后的数月至数年时间内也有可能发展成艾滋病，导致最终艾滋病发病的原因可能是病毒株的缺失得到了修复阳1。减毒活病毒存在突变成野毒株的风险，其整合至宿主染色体上可能导致其他病理过程(如肿瘤)，安全性不能保证。因此，灭活疫苗和减毒活疫苗越来越不受关注。第一章引言1．1．2．2合成肽疫苗HW合成肽疫苗是用人工方法将HW．1gpl20第三可变区(V3)肽链连接于其他大分子上而形成的疫

8、苗。临床试验发现，因仅带有一个蛋白甚至一个肽段，结构与天然病毒相差甚远，多肽疫苗刺激机体产生的抗体通常不能中和感染者携带的病毒，基本上不能诱导细胞免疫。1．1．2．3蛋白亚单位疫苗HIV蛋白亚单位疫苗是利用HIV-1基因编码的各种蛋白产物的抗原性，将有关基因进行重组后在原核和真核细胞系统表达，再经抽提、纯化成为基因工程亚单位疫苗。在早期试验中，采用CHO细胞表达HIVGpl20免疫黑猩猩后，黑猩猩可抵抗低剂量的同源HW毒株的攻击p1。进一步的研究发现，对黑猩猩进行多次HIV-1sF