表达hiv-1 crf01_ae gp145的dna与mva疫苗构建及免疫原性评价

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1、中文图书分类号：Q7密级：公开UDC：570学校代码：10005硕士学位论文MASTERALDISSERTATION论文题目：表达HIV-1CRF01_AEgp145的DNA与MVA疫苗构建及免疫原性评价论文作者：湛倩倩学科：生物学指导教师：曾毅院士论文提交日期:2012年6月UDC：570学校代码：10005中文图书分类号：Q7学号：S201215029密级：公开北京工业大学理学硕士学位论文题目：表达HIV-1CRF01_AEgp145的DNA与MVA疫苗构建及免疫原性评价英文题目：CONSTRUC

2、TIONANDIMMUNOGENICITYSTUDYOFDNAANDMVAVACCINEEXPRESSINGHIV-1CRF01_AEGP145论文作者：湛倩倩学科专业：生物学研究方向：细胞生物学与基因工程申请学位：理学硕士指导教师：曾毅院士所在单位：生命科学与生物工程学院答辩日期：2015年6月授予学位单位：北京工业大学独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含

3、为获得北京工业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。签名：湛倩倩日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解北京工业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵守此规定）签名：湛倩倩日期：2015年6月25日导师签名：曾毅日期：2015年6月25日摘要摘要艾滋病疫情自发

4、生以来呈现不断扩散和蔓延的趋势，全球对HIV的传播采取了各种预防和干扰措施，但是仍然面临着很严峻的形势，目前尚无有效的防治艾滋病的疫苗。由于HIV病毒高度的遗传多样性以及复制过程中的高重组率和突变率使得HIV在世界范围内的传播过程产生了很多亚型和重组型。近几年，CRF01_AE亚型在中国的传播非常迅速，已经成为中国HIV感染者中的主要亚型。本课题组致力于艾滋病治疗型疫苗的研究，前期提出的多载体疫苗序贯重复免疫策略能在小鼠及恒河猴体内诱导持久的特异性细胞免疫反应，有较好的应用前景。因此非常有必要利用前期

5、的研究经验构建基于CRF01_AE亚型HIV基因的多载体疫苗，并对疫苗的免疫效果进行评价。本研究利用前期研究获得并改造的HIV-1CRF01_AEenv共享基因，去除其胞内区序列得到gp145基因，将此基因克隆至pVR载体，构建了DNA疫苗pVR-AEgp145。将gp145基因克隆至重组MVA载体系统的穿梭质粒pSC11上，以穿梭质粒转染提前感染了野生型MVA病毒的BHK-21细胞，通过同源重组获得携带gp145基因的重组MVA疫苗，即rMVA-AEgp145。以Westernblot方法证实DNA

6、疫苗和重组MVA疫苗皆可有效表达Gp145蛋白。以DNA疫苗分别于0周和3周免疫BALB/c小鼠，采用ELISPOT方法检测了末次免疫后不同时间点的Gp145特异性细胞免疫反应水平。结果显示DNA疫苗单独免疫时末次免疫后2周可以检测到小鼠体内的特异性细胞免疫反应，3周细胞免疫反应达到高峰，5周免疫水平明显下降。进一步在BALB/c小鼠中进行了rMVA-AEgp145疫苗单独及与DNA疫苗pVR-AEgp145联合免疫的效果评价。结果表明重组MVA疫苗单独免疫2次或与DNA疫苗联合免疫皆可诱导较高水平的

7、特异性细胞免疫反应，单独免疫及联合免疫的反应水平相当；rMVA-AEgp145与pVR-AEgp145联合免疫时末次免疫后1周的小鼠可产生一定水平的Env特异性的体液免疫反应，体液免疫反应水平明显高于rMVA-AEgp145单独免疫组。综上所述，我们成功构建了携带HIV-1CRF01_AE亚型gp145基因的重组DNA及重组MVA疫苗；两种疫苗联合免疫时可诱导一定水平的特异性的体液免疫反应；两种疫苗单独及联合免疫皆可诱导较高水平的HIV特异性细胞免疫反应。还需进一步构建其他载体疫苗进行多载体疫苗联合免

8、疫的评价。关键词：艾滋病疫苗；基因；gp145；质粒；痘病毒科IAbstractAbstractSinceHIVwasidentifiedasthecausativeagentofHIV/AIDSintheworld,itspreadandexpendedquickly.Thoughavarietyofinterventionandpreventionprogramshavebeeninstituted,thereisstillabigchallenge