hiv-1 c亚型重组mva（modified vaccinia ankara）疫苗制备工艺研究

《hiv-1 c亚型重组mva（modified vaccinia ankara）疫苗制备工艺研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、４分巧号０８１密级公井ＵＤＣ编号《方Ａ掌巧女研《化徐ＨＩＶ－巧目１Ｃ亚型重组ＭＶＡ（ＭｏｄｉｆｉｅｄＶａｃｃｉｎｉａＡｎｋａｒａ）巧苗制备工芝研巧Ｐｒｅｐａｒａｔ－ｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓＳｔｕｄｙｏｆＨＩＶ１ＣＳｕｂｔｖｐｅＲｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎＭＶＡＶａｃｃｉｎｅ学院（所、中心）生命科学学晓专业名称生物工程硏究生姓名李冰香学号８２０１２０３０６７导师姓名背春杰／错巧佑职称教巧２０１５年１１月■々扉页：论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研究成果。除了文

2、中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果不存在割窃或抄一袭行为。与作者同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文（含电子版），也可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可Ｗ将论文用于查阅或借阅服务：学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。（内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）＾，研究生签名：乐４若导师签名：日

3、期；穿＂句如中文摘要ＨＶ－１（ＩＣ亚型重组ＭＶＡＭｏｄ也ｅｄＶａｃｃｉｎｉａＡｎｋａｒａ，修饰的安哥拉痘苗病毒）扭Ｖ－１ＭＶＡ疫苗是将结构基因和调节基因插入病毒载体（）构建的重组非复制型ＭＶＡ疫苗。ＭＶＡ在鸡庇成纤维细胞（ｃｈｉｃｋｅｍｂｉｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＥＦ）多代次传代后，失去了包括宿主决定基因在内的ＤＮＡ片断和基因，插入到该病毒基因组的外源重组基因能在细胞胞浆中表达，属于安全而高效的病毒载体疫苗。目前痘苗病毒作为新型载体在疫苗研究、基因治疗、生物活性多肤生产等方面有诸多运用，在国内尚没有类似疫苗的大规模生产和销售。本课题是中

4、国医学科学院医学生物学研究所医学遗传学研究室艾滋病疫苗课一。题组的部分本研究中，基于痘苗病毒的结构和特征，从鸡胚细胞培养病毒出，进行冻融超声、分步离也、离子交换层析和超滤浓缩发，摸索了不同实验条件，，最终初步获得中试规模制备的重姐的ＭＶＡ疫苗建立了相应的纯化工艺，－ＩＶ１基本达到了疫苗质量管理的要求，为Ｈ疫苗或Ｗ此类病毒载体疫苗的生产提供了有价值的参考。首先，我们进行了重姐ＭＶＡ病毒的培养和扩增。使用鸡胚制备ＣＥＦ细胞后接种ＭＶＡ毒种，待细胞病变后收集病变细胞，；随后将收集细胞离也富集、重悬进一，经冻融、超声、离也、浓缩悬浮液，得到病毒原液；步，将病毒原液分

5、别进行３０％廉糖和廉糖垫底离也，超声、超滤浓缩后，使用ＱＳｅｈｒｏｓｅ化ｐＳＯＵＲＣＥ３０证Ｖ－和离子交换层析柱纯化病毒液，１Ｑ最后浓缩定量，完成重组ＭＶＡ疫苗的制备。在制备过程中，包括细胞培养、病毒扩增、纯化富集等都进行标准化操作，并对制备后疫苗进行检定（包括ｐＨ值检测、滴度检测、无菌检查、内毒素检测、残余细胞ＤＮＡ、牛血清蛋白残留量、细胞蛋白残留量检测等），并评估了重组ＭＶＡ免疫后产生的持异性抗体和细胞免疫应答。Ｉ结果显示，该病毒疫苗的纯化制备工艺达到了疫苗的检定标准，病毒基因组扩增得到Ｅｎｖ、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｎｅｆ和Ｔａｔ的相应目栋基因，蛋白免

6、疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂ化ＷＢ）也显示目的蛋白获得表么ＥＬＩＳＡ提示免疫后小鼠可Ｗ诱导相应抗体表达－Ｙ，ＥＬＩＳＰＯＴ检测到的圧Ｎ数目提示具有良好的细胞免疫反应，该疫苗的制备工艺及纯化方法为类似的疫苗中试生产技术提供了有用的参考数据。ＨＩＶ－１：ＭＶＡ（ＭｏｄｉｆｉｅｄＶａｃｃｉｎｉａＡｎｋａｒａ关键词；）；疫苗；纯化；检定ｎＡｂｓｔｒａｃｔ－ＭＶＡＭＨＩＶ１Ｃｓｕｂｔｙｐｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｄｉ打ｅｄＶａｃｃｉｎｉａＡｎｋａｒａｖａｃｃｉｎｅｉｓａ（）ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖａｃｃｉｎｅｍｏｄ巧ｅｄｖａｃｃｉ打ｉ

7、ａＡｎｇｏｌａｗｈｉｃｈｃａｒｒｉｅｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ－ｅ打ｅｏｆＨＩＶ１化ｅｘｐｒｅｓｓＥｎｖＧａＰｏｌ，Ｎｅｆａ打ｄＴ化ＭＶＡｌｏｓｔｈｏ巧ｅｎｅａｎｄｌａ巧ｅｇ，ｇ，ｇａｍｏｕｒＵｓｏｆＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓａｆｔｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｃｈｉｃｋｅｍｂｒｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ（ＣＥＦ）ｆｔ）ｒｍｕｌ