重组MVA病毒载体疫苗（MVA-SPD1_MS）的抗肿瘤效果研究

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1、分类号：Ｒ７３单位代码：１０１８３研究生学号：２０１３３４２０１７密级：吉林大学硕士学位论文学术学位（）重组ＭＶＡ病毒载体疫苗（ＭＶＡ－ＳＰＤ１／ＭＳ）的抗肿瘤效果研究Ｓｔｕｄｏｎｎ－Ａｔ－ｉｔｕｍｏｒＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｃｏｍｂｙｉｎａｎｔＭＶＡｂａｓｅｄＶａｃｃｉｎｅＭＶＡ－ｓＰＤ／ＭＳ（）作者姓名：徐平专业：微生物学研宄方向：肿瘤疫苗指导教师：于湘晖教授培养单位：生命科学学院２０１６年６月－ｓＰＤｌ重组ＭＶＡ病毒载体疫苗（ＭＶ

2、Ａ／ＭＳ）的抗肿瘤效果研究－ｍｏ－ＳｔｕｄｏｎＡｎｔｉｔｕｒＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＭＶＡｂａｓｅｄｙＶａｃｃ－ｉｎｅＭＶＡｓＰＤ／ＭＳ（）作者姓名：徐平专业名称：微生物学指导教师：于湘晖教授学位类别：理学硕士论文答辩日期：２０１６年／月《日授予学位日期：年月未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租（但纯学术性使、改编等有

3、碍作者著作权的商业性使用用不在此限）。。否则应承担侵权的法律责任，吉林大学硕士学位论文原创性声明，本人郑重声明：是本人在指导教师的指导下所呈交学位论文，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期：冰釦中文摘要重组ＭＶＡ病毒载体疫苗ＭＶＡ－ｓＰＤｌ／ＭＳ的抗肿瘤效果研究（）近

4、年来全球癌症的发生率和死亡率呈现持续快速增长趋势，且这种情况在发展中国家尤为严峻，已经严重威胁人类健康与生命。目前，临床上治疗癌症的标准手段主包括手术、放疗、化疗，在过去的十年中癌症免疫疗法已逐渐发一展成为第四种癌症治疗策略。肿瘤基因疫苗作为肿瘤免疫疗法的方式之，在医学免疫学领域被广泛研究，并且己有多种肿瘤基因疫苗在临床研宄中取得了可喜的结果。肿瘤基因疫苗是由编码肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原的基因与真核表达载体或病毒载体共同组成，肿瘤抗原通过ＤＮＡ或病毒载体导入人或动物体内后，表达抗

5、原蛋白，诱导机体产生特异性体液免疫反应及细胞免疫反应，从而产生抗肿瘤的免疫保护力：、疫。肿瘤基因疫苗设计的关键因素主要包括抗原靶点苗载体、免疫佐剂及免疫策略的选择。自１９８２年ＤＮＡ重组技术首次应用于痘苗病毒开始，痘病毒、鸡痘病毒金丝雀痘病毒等多种痘病毒被广泛应用于开发基因工程活载体疫苗和生物药物。涉及癌症、艾滋病、肝炎、疟疾和结核等多种疾病的预防和治疗领域。高度减毒的宿主限制性病毒株ＭＶＡＭｏｄｉｆｉｅｄＶａｃｃｉｎｉａＶｉｒｕｓＡｎｋａｒａ具有外源基因容（）量大、稳定高表达外

6、源基因，、独特的安全性及良好的免疫原性等生物学特性作为疫苗载体在多种传染病及肿瘤防治的临床前和临床研宄中被广泛应用。本课题组在前期的工作中设计了以ＭＵＣ１和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ为靶点，ＣｐＧ、ｓＰＤｌ、ＤＶ－－Ａｄ－ＭＳＩＬ２为分子佐剂的ＤＮＡ疫苗ＣｐＩＬ２ｓＰＤｌ／ＭＳ及腺病毒载体基因疫苗，－Ａｄｂｏｏｓｔ的免疫策略并且将两种形式的疫苗联合使用ｍｅ，成功，采用ＤＮＡｐｒｉ的在荷瘤鼠模型上诱导出了较强免疫反应，产生了较好的抗肿瘤效果。在本组前期工作的基础上，，本篇论文主要探究了以ＭＶＡ为载体

7、融合表达可溶性ｓＰＤｌ以及肿瘤抗原ＭＵＣ１和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的肿瘤基因疫苗的抗肿瘤效果，同时也初－步尝试了其与ＤＮＡ疫苗ＣｐＤＶ－ＩＬ２ｓＰＤｌ／ＭＳ联合使用的效果。首先，我们成功地构建了融合表达可溶性ｓＰＤｌ、ＭＵＣ１及Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的重组－ｓＰＤ穿梭表达载体ｐＳＣｌｌＭｌｌ／ＭＳ，然后与痘病毒载体ＭＶＡ重组。通过大量的Ｉ－ｓ筛选工作，获得了能够稳定高表达外源蛋白的重组痘病毒疫苗ＭＶＡＰＤｌ／ＭＳ。同时．，为了寻找理想的疫苗评价体系，我们构建了ＲＦＰ标记的稳定表达人＋１ｒｖＦＰ

8、－ＭＵＣ和Ｓｕｉｖｉｎ分子的鼠源性黑色素瘤细胞系ＭＳＢ１６，然后开展了不（Ｒ）＋－Ｂ立了黑色素同克隆ＲＦＰＭＳ１６细胞的成瘤实验及成瘤剂量摸索实验，最终建瘤小鼠肿瘤模型。－然后ｓＰ－ＭＳ，我们考察了单独痘病毒载体疫苗ＭＶＡＤｌ以下简称ｒＭＶＡ在（）黑色素瘤小鼠模型上的抑瘤效果。结果表明，阴性对照ＰＢＳ组小鼠平均瘤重为７．８８±０．８１ｇ、