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时间:2019-03-12
《hiv-1 c亚型重组mva(modified vaccinia ankara)疫苗制备工艺研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、4分巧号081密级公井UDC编号《方A掌巧女研《化徐HIV-巧目1C亚型重组MVA(ModifiedVacciniaAnkara)巧苗制备工芝研巧Preparat-ionProcessStudyofHIV1CSubtvpeRecombinationMVAVaccine学院(所、中心)生命科学学晓专业名称生物工程硏究生姓名李冰香学号8201203067导师姓名背春杰/错巧佑职称教巧2015年11月■々扉页:论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研究成果。除了文
2、中特别加W标注和致谢的地方外,,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果不存在割窃或抄一袭行为。与作者同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下:学校有权保留本论文(含电子版),也可W采用影印、缩印或其他复制手段保存论文;学校有权公布论文的全部或部分内容,可W将论文用于查阅或借阅服务:学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖;学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。(内部或保密的论文在解密后应遵循此规定)^,研究生签名:乐4若导师签名:日
3、期;穿"句如中文摘要HV-1(IC亚型重组MVAMod也edVacciniaAnkara,修饰的安哥拉痘苗病毒)扭V-1MVA疫苗是将结构基因和调节基因插入病毒载体()构建的重组非复制型MVA疫苗。MVA在鸡庇成纤维细胞(chickembiyofibroblast,CEF)多代次传代后,失去了包括宿主决定基因在内的DNA片断和基因,插入到该病毒基因组的外源重组基因能在细胞胞浆中表达,属于安全而高效的病毒载体疫苗。目前痘苗病毒作为新型载体在疫苗研究、基因治疗、生物活性多肤生产等方面有诸多运用,在国内尚没有类似疫苗的大规模生产和销售。本课题是中
4、国医学科学院医学生物学研究所医学遗传学研究室艾滋病疫苗课一。题组的部分本研究中,基于痘苗病毒的结构和特征,从鸡胚细胞培养病毒出,进行冻融超声、分步离也、离子交换层析和超滤浓缩发,摸索了不同实验条件,,最终初步获得中试规模制备的重姐的MVA疫苗建立了相应的纯化工艺,-IV1基本达到了疫苗质量管理的要求,为H疫苗或W此类病毒载体疫苗的生产提供了有价值的参考。首先,我们进行了重姐MVA病毒的培养和扩增。使用鸡胚制备CEF细胞后接种MVA毒种,待细胞病变后收集病变细胞,;随后将收集细胞离也富集、重悬进一,经冻融、超声、离也、浓缩悬浮液,得到病毒原液;步,将病毒原液分
5、别进行30%廉糖和廉糖垫底离也,超声、超滤浓缩后,使用QSehrose化pSOURCE30证V-和离子交换层析柱纯化病毒液,1Q最后浓缩定量,完成重组MVA疫苗的制备。在制备过程中,包括细胞培养、病毒扩增、纯化富集等都进行标准化操作,并对制备后疫苗进行检定(包括pH值检测、滴度检测、无菌检查、内毒素检测、残余细胞DNA、牛血清蛋白残留量、细胞蛋白残留量检测等),并评估了重组MVA免疫后产生的持异性抗体和细胞免疫应答。I结果显示,该病毒疫苗的纯化制备工艺达到了疫苗的检定标准,病毒基因组扩增得到Env、Gag、Pol、Nef和Tat的相应目栋基因,蛋白免
6、疫印迹(Westernb化WB)也显示目的蛋白获得表么ELISA提示免疫后小鼠可W诱导相应抗体表达-Y,ELISPOT检测到的圧N数目提示具有良好的细胞免疫反应,该疫苗的制备工艺及纯化方法为类似的疫苗中试生产技术提供了有用的参考数据。HIV-1:MVA(ModifiedVacciniaAnkara关键词;);疫苗;纯化;检定nAbstract-MVAMHIV1Csubtyperecombinationodi打edVacciniaAnkaravaccineisa()recombinantvaccinemod巧edvacci打i
7、aAngolawhichcarriesstructureandregulation-e打eofHIV1化expressEnvGaPol,Nefa打dT化MVAlostho巧eneandla巧eg,g,gamourUsofDNAfragmentsafterproliferationinchickembryofibroblast(CEF)ft)rmul
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