多载体hiv中和抗体基因疫苗序贯和重复应用的研究

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1、中文图书分类号：Q81密级：公开UDC：577学校代码：10005硕士学位论文MASTERALDISSERTATION论文题目：多载体HIV中和抗体基因疫苗序贯和重复应用的研究论文作者：祁秋雨学科：生物学指导教师：曾毅教授论文提交日期:2015年6月UDC：577学校代码：10005中文图书分类号：Q81学号：S201215004密级：公开北京工业大学理学硕士学位论文题目：多载体HIV中和抗体基因疫苗序贯和重复应用的研究英文题目：SEQUENTIALANDREPEATDAPPLICATI-ONSTUDYONHIVNEUTRALIZI

2、NGAN-TIBODIESGENEVACCINE论文作者：祁秋雨学科专业：生物学研究方向：细胞生物学与基因工程申请学位：理学硕士指导教师：曾毅教授所在单位：生命科学与生物工程学院答辩日期：2015年6月授予学位单位：北京工业大学独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京工业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并

3、表示了谢意。签名：祁秋雨日期：2015年5月7日关于论文使用授权的说明本人完全了解北京工业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵守此规定）签名：祁秋雨日期：2015年5月7日导师签名：曾毅日期：2015年5月7日主要英文缩写词主要英文缩写词缩写词英文释义中文释义AAVadeno-associatedvirus腺相关病毒Ad5Adenovirustype55型腺病毒AIDSAccqui

4、redImmunoDeficiencySyndrom获得性免疫缺陷综合征bpbasepair碱基对CPEcytopathiceffect细胞病变效应DMEMDulbecco'sModifiedEagleMediumDMEM培养基EDTAEthylenediaminetetraaceticAcid乙二胺四乙酸ELISAEnzyme-linkedimmunosorbent酶联免疫吸附测定FBSFetalBovineSerum胎牛血清hhour小时HIVhumanimmunodeficiencyvirus人免疫缺陷病毒HRPHorsera

5、dishperoxidase辣根过氧化物酶IFAimmunofluorescenceassay免疫荧光试验Kbkilobases千碱基LBLuria-Bertani细菌培养基MOImultiplicityofinfection感染复数ODopticaldensity吸光度PBSphospHatebufferedsaline磷酸盐缓冲液SHIVsimian-Humanimmunodeficiencyvirus人/猿嵌合免疫缺陷病SIVsimianimmunodeficiencyvirus猴免疫缺陷病毒TCID50TissueCultu

6、reInfectiousDose5050%组织培养感染剂vgviralgenome病毒基因组vpviralparticle病毒颗粒I摘要摘要HIV感染机体后可诱导产生细胞免疫应答和体液免疫应答，细胞免疫作用于受感染细胞继而控制已发生的感染，体液免疫中的中和抗体能够防止游离的病毒发生扩散。用经典的疫苗策略诱导机体免疫系统产生针对HIV的细胞或体液免疫的方法尚不能有效抵御HIV感染。另一种途径是依靠转基因载体在机体细胞内部表达HIV中和抗体，绕过激活宿主免疫应答使之产生抗体的过程，该途径可能是一种行之有效的HIV治疗方法。将HIV中和抗

7、体基因2G12等与穿梭质粒构成双启动子重组载体，该载体可表达抗体轻链和重链。重组质粒鉴定后包装病毒，在病毒扩增，纯化等步骤后，在细胞水平进行病毒的滴度测定和抗体表达测定；重组病毒在动物水平进行最佳免疫剂量测定；用不同的病毒载体注射小鼠，希望通过以最少的免疫次数与免疫剂量达到较高的抗体表达浓度与抗体表达持续时间。本文初步探讨了应用F2A序列的HIV中和抗体表达策略。将抗体轻重链基因通过F2A连接，与穿梭质粒构成重组载体。利用该穿梭质粒包装、扩增与纯化出重组Adv病毒，检测病毒滴度后用该病毒感染细胞表达出中和抗体2G12；用该重组Adv

8、载体疫苗注射小鼠，经检测成功表达出HIV中和抗体2G12。本课题将携带相同或不同HIV抗体基因的多种载体注射小鼠体内，希望能够在小鼠体内持续高效地表达中和抗体，为减少或消除体内HIV病毒、治疗艾滋病奠定基础。关键词：HIV；中和抗体；