以重组b群脑膜炎奈瑟菌fhbp为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究

《以重组b群脑膜炎奈瑟菌fhbp为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北北方学院学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。导师签名谴z呵研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。别醛轹霹王净芝日1‘

2、p，，为，溯名F徘埤整m艇加陟伸、0．r、叼堋名：劐年￡一1究加开目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一3英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一5研究论文以重组B群脑膜炎奈瑟菌fl-／BP为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一88月g吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··24附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··26附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一32讨论

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··33结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··37综述B群脑膜炎奈瑟菌疫苗的研发及挑战⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-·42致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··55个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··56中文摘要以重组B群脑膜炎奈瑟茵fHBP为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究摘要脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis，Nm)是专一人致病的革兰阴性双球菌，依据荚膜多糖的化学和免疫学性质，可分为13个

5、血清型(A、B、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E、W135)。95％以上的病例为A、B、C、Y和W135五个血清型所致。尽管A、C、Y、W135群的荚膜多糖(TI一2抗原)免疫原性弱，但将其与蛋白载体结合后(转变其为TD抗原)，可以诱导出满意的保护性。B群荚膜多糖是[N．乙酰神经氨酸。Q．(2．8)1，其免疫原性弱，且为自身抗原，即使与蛋白载体结合也不能取得良好效果。至今，外膜蛋白(outermembraneprotein)疫苗是预防B群菌株暴发流行的唯一选择，但是这类疫苗有株特异性(strainspecific)，只对流行菌株有保护性。Nm全基因组测序

6、后，运用反向疫苗学(reversevaccinology)的方法，发现了数个在所有B群Nm中均较保守的蛋白，免疫原性强，且保护性明显。其中最引人注目的是fHBP(factorHbindingprotein)。以该蛋白为主要成分的疫苗正进行临床试验。本研究以重组B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白fHBP为载体与c群多糖(groupCmeningococcalpolysaccharide，GCMP)共价结合，制备结合疫苗，免疫小鼠，检测小鼠血清中针对B群和C群脑膜炎奈瑟菌的杀菌抗体，评价该重组蛋白作为结合疫苗载体的可行性及针对B群Nm的交叉保护性。研究方法是扩增加印并连接至1]

7、pET30a(+)表达载体上，转化至E．coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达，镍亲和层析柱纯化rfHBP，CNBr活化法将rfHBP与GCMP共价结合，制备结合疫苗，免疫小鼠，间接ELISA法检测血清中GCMP抗体和rfHBP抗体滴度，TTC法检测结合物诱导的分别针对B群和C群Nm的杀菌抗体水平。本研究成功扩增历如并连接_至pET30a(+)表达载体上，大肠杆菌中诱导表达rfHBP，纯化后与GCMP结合。结合物免疫小鼠后，检测到的针对GCMP的IgG抗体滴度中文摘要与GCMP组比较有明显加强效应；三针免疫后，针对C群Nm的杀菌抗体滴度高于GCMP对照组，有

8、统计学意义(氏0．05)；针对B群Nm的杀菌抗体滴度与rfHBP对照组间无统计学意义(胗0．05)；两组结合物诱导的分别针对B群NmCMCC29361株禾1]ATCC700111株的杀菌抗体滴度间无统计学意义(胗O．05)。结果显示结合疫苗免疫小鼠后检测到的针对C群Nm的杀菌抗体高于单独GCMP组，证明该重组蛋白可作为结合疫苗的载体蛋白；且在结合过程中较好地保留了蛋白的免疫原性，对B群Nm有良好的交叉保护作用。关键词：B群脑膜炎奈瑟菌；外膜蛋白；结合疫苗；H因子结合蛋白荚文摘要PREPARAl’IONoFMENINGOCOCCALCONJUGATEVACCINEU

9、SINGR