人群脑膜炎奈瑟菌带菌检验方法的研究.doc

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1、人群脑膜炎奈瑟菌带菌检验方法的研究作者：王海燕，邵荣标，毕诚，郑春早【摘要】目的：研制一种能够在低温下保持脑膜炎奈瑟菌活性并具有增菌作用的培养基。方法：配制一种小牛血清“双抗”培养基，用已知量A、C群脑膜炎奈瑟菌检定其保菌和增菌效果，并用该法在正常人群中检测带菌率，以常规方法的检测结果作配对比较。结果：应用小牛血清“双抗”培养基可使脑膜炎奈瑟菌在4℃24小时内基本不死亡，部分菌株可生存8天，同时可使存活的细菌从3~9CFU/ml增加到(6~7)×107CFU/ml；对364名正常人检测，其检出率达1.65%,而常规方法

2、检出率为0(P<0.05)。结论：小牛血清“双抗”培养基在4℃的不利条件下，有显著保菌作用，同时具有显著增菌作用。【关键词】脑膜炎奈瑟菌；检验方法；小牛血清；保菌；增菌[Abstract]Objective：Tomanufactureoneculturemedium(forshort:newmedium)whichcouldkeepthelifeofNeisseria(N.)meningitidisinlowtemperature,andcouldaugmentthenumberofN.meningitidis.

3、Methods:Oneculturemediumcontainingnewbovineserumandtwokindsofantibioticwasprepared.TheeffectsofkeepinglifeofN.meningitidisweredetectedbyknownnumberofAandCtypesofN.meningitidis.ThencarriersofN.meningitidisinthecrowdweredetected,comparedwiththeroutinedetectingmeth

4、odascontrol.Results:ThenewmediumcouldalmostkeepthelifeofN.meningitidisfor24hoursin4℃,andcouldaugmentthenumberofN.meningitidisfrom3~9CFU/mlto（6~7）×107CFU/mlin37℃.SomestrainsofM.meningitidiscouldlivefor8daysinthenewmediumin4℃.With364healthypersonsdetectedwiththene

5、wmedium,thepositiverateofcarryingN.meningitidiswas1.65%,butwithroutinedetectingmethod,thepositiveratewas0(P﹤0.05).Conclusion:Innfavourableconditionof4℃,thenewmediumcouldkeepthelifeofN.meningitidisdistinguishingly.Andinthefavourableconditionof37℃,thenewmediumhadt

6、hefunctionofaugmentingthenumberofN.meningitidisprominently.[Keywords]Neisseriameningitidis;Detectmethod;Newbovineserum;Keepthelifeofbacteria;Augmentthenumberofbacteria脑膜炎奈瑟菌对干燥、寒冷、热、阳光等非常敏感，在室温中3小时就死亡[1]，同时营养要求也很高。因而对脑膜炎患者或带菌者的检查，常规的检验方法需要用37℃3预温的巧克力色血琼脂平板进行床边接种

7、，并保温运送至实验室检验，这种方法对人群带菌状况和流行病学的监测尤其困难。为方便监测并反映人群的真正带菌状况，就如何保持脑膜炎奈瑟菌的活性、提高检出率，我们对所用培养基进行了研究。1材料与方法1.1小牛血清琼脂将市售血琼脂基础培养基配制后121℃15分钟灭菌，待冷却至50℃左右时，按10%加入小牛血清，作脑膜炎奈瑟菌活菌计数时倾注平板用。葡萄糖蛋白胨水:含1%葡萄糖、1%蛋白胨、0.5%氯化钠，121℃15分钟灭菌后备用。小牛血清“双抗”培养基[1]：取上述制备的葡萄糖蛋白胨水溶液198ml、“双抗”水溶液2ml（万古

8、霉素、多黏菌素B的浓度分别为660U/ml和5000U/ml）、无菌小牛血清200ml，充分混匀后，用无菌的10ml吸管分装于无菌的试管中，每管1ml。血琼脂平板：将市售血琼脂基础培养基加水后121℃15分钟灭菌，待冷却至50℃左右时，按10%加入新鲜的预温至37℃的绵羊血，随加随混匀，再加入万古霉素和多黏菌素B溶液，使其含量分别