以β-葡聚糖为佐剂的脑膜炎多糖结合疫苗制备及其免疫原性研究

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1、分类号密级ＵＤＣ学校代码１０５５５戀或＃义拿硕±学位论文（专业学位）葡聚搪为佐剂的脂膜炎多據结合疫苗制备及其免疫原性研究研巧生姓名：乔卫林指导教师、职祿：赵玉宝教授合作导师、职称：胡涛研究员专业学位类别（领域）：制药工程研究方向：生物制药所在学院：化学化工学院二—五年五月厳？義＃义攀论文题目从Ｂ－葡聚糖为佐剂的脂膜炎多搪结合疫苗制备及其免疫原性研究论文作者签名互漸、：奇指导教师签名：杂韦合作导师签名；论文评阅人１；评阅人２；评阅人３：答辩

2、委员会主席：１委员；委员２；委员３；委员４；答辩日期：年月曰南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的１地方外论文中不包含研究成果。尽我所知，餘了论文中特别加＾＾示注和致谢的，其他人己经发表或撰写巧的研巧成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献巧已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：為ＫＥ相、矿年ｔ月多日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文

3、是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完它成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得其单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规位定，目Ｐ；学校有或权部保分留学位论文，允许学位论文被查它阅和借阅；学校可＾苗公布学论文的全部湖南省有内关容，部可采用复印、缩印或其手段保留学位论文；学校可根据国家或论文全口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定位享受论相义全关文权益。同意授权中国科学信息技术研巧所将本学位论文收录

4、到《中国学文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于渉密的学位论，解密后适用该授权。作者签导名：乔里诚＾如乐年ｊｒ月日师签名＾年ｔ月Ｗ曰每以-葡聚糖为佐剂的脑膜炎多糖结合疫苗制备及其免疫原性研究摘要：流行性脑脊髓膜炎是由脑膜炎奈瑟氏球菌引起的化脓性脑膜炎，此病分布范围广，致死率高，具有耐药性。但是单纯的脑膜炎双球菌荚膜多糖（简称CPS）属胸腺非依赖性抗原不能诱导免疫记忆，且只适用于成人，不适合常规接种两岁以下儿童。将载体蛋白与CPS共价结合可使其转化成T细胞依赖性抗原，从而刺激合成T细胞依赖性抗体，不仅可以产生免疫记忆，还能提高免疫

5、球蛋白IgG的抗体比例及抗体亲和力的成熟，这种多糖结合疫苗可适用于成人，也适用于婴幼儿。。然而，目前这些结合疫苗均存在接种剂量较大、免疫效率不高的缺点，因此，亟待研发效率更高和免疫原性更强的新型结合疫苗。尽管-葡聚糖佐剂已经被用来提高抗原的免疫原性，但是将佐剂与结合疫苗化学偶联或物理混合的研究几乎没有被研究。-葡聚糖可以促进细胞免疫和体液免疫，通过与特殊受体如CR3和Dectin-1等结合，可以激活巨噬细胞，影响细胞因子的释放。本次研究中，活化的CPS与破伤风类毒素（TT）化学偶联成CPS-TT，-葡聚糖与高碘酸钠氧化羟基被氧化成醛基，再将-葡聚糖偶联CPS-

6、TT生成CPS-TT-G。将-葡聚糖与CPS-TT物理混合得到CPS-TT/G1和CPS-TT/G2。使用红外色谱，核磁共振，动态光散射仪，高效液相色谱分析等对产物进行I结构分析。将CPS，CPS-TT，CPS-TT/Al，CPS-TT-G,CPS-TT/G1和CPS-TT/G2免疫小鼠后运用ELISA方法测定小鼠血清中的抗体滴度，研究发现CPS产生的CPS特异性的IgM抗体滴度远远低于CPS-TT和CPS-TT-G的抗体滴度，这表明将TT偶联到CPS上可大大增加CPS特异性的IgM抗体滴度，同时注射第三针CPS-TT-G产生的CPS特异性IgG/IgM比率远远高于

7、CPS-TT。这说明加入-葡聚糖使抗体的合成更多地从IgM转为合成IgG。将CPS-TT-G免疫小鼠21d后得到的CPS特异性IgG抗体滴度是CPS-TT的8.2倍。这可能是将-葡聚糖与CPS-TT化学偶联可保证二者同时到达抗原递呈细胞。然而，将-葡聚糖与CPS-TT物理混合后，CPS特异性IgG抗体滴度降低了，这可能是因为将-葡聚糖与CPS-TT物理混合后，-葡聚糖会优先到达抗原递呈细胞，占据B细胞结合位点。这充分说明，将-葡聚糖化学偶联是提高结合疫苗CPS特异性抗体滴度的一种很好的策略。关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖；佐剂；-葡聚糖；免