五味子乙素预防bap致htr-8sv neo细胞氧化损伤及dna损伤的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122503蚵妗(E搿大§HebeiMedicalUniversity科学学位五味子乙素预防BaP致HTR-8/SVneo细胞氧化损伤及DNA损伤的研究研究生：章艳燕导师：陈亚琼主任医师专业：妇产科学二级学院：武警后勤学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料

2、、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名导师签章：二级学院领导盖章：年j月]^日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人己发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：掉社)爲导师签章:入if年j月7。曰目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写……………………………………

3、…………………………………7研究论文五味子乙素预防BaP致HTR-8/SVneo细胞氧化损伤及DNA损伤的研究前言………………………………………………………………………8材料与方法……………………………………………………………9结果……………………………………………………………………..23附图……………………………………………………………………..27附表……………………………………………………………………..34讨论……………………………………………………………………..36结论……………………………………………………………………..42参考文献……

4、…………………………………………………………..43综述空气污染与妊娠期并发症……………………………………51致谢…………………………………………………………………………..57个人简历……………………………………………………………………..58中 文 摘 要 五味子乙素预防BaP致HTR-8/SVneo细胞氧化损伤及DNA损伤的研究摘要目的：探讨五味子乙素对BaP致HTR-8/SVneo细胞氧化损伤及DNA损伤的预防作用，并初步研究其可能的作用机制。方法：1建立体外BaP损伤模型及测定不同浓度五味子乙素的保护作用：实验分组：对照组、BaP染毒组、BaP

5、染毒+不同剂量的五味子乙素（0.1、0.5、2μmol/L）组。用MTS法测定细胞存活率。2氧化系统物质的分析：测定相关氧化物质，活性氧（ROS）、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶（LDH）的含量变化及一氧化氮合酶/一氧化氮（NOS/NO）系统中一氧化氮（NO）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、总一氧化氮合酶（TNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的含量变化。3抗氧化系统物质的分析：测定抗氧化相关酶，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量变化。4DNA氧化损伤程度的评价：通过彗星实验(单细胞凝胶电泳)测定细胞DNA损伤程度；利

6、用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞外液中DNA氧化损伤标记物8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量。5DNA氧化损伤修复的评价：半定量PCR（RT-PCR）及实时定量PCR（qRT-PCR）技术分别检测碱基切除修复途径相关基因人X射线修复交差互补组1（XRCC1）、人多聚ADP核糖聚合酶（PARP1）、人8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGG1）基因的表达水平，ELISA法检测XRCC1、PARP1蛋白表达量和免疫印迹法（westernblotting）检测人8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶OGG1蛋白表达量。结果:1五味子乙素对BaP致HTR-8/SVneo

7、细胞损伤的保护作用经MTS法检测。根据染毒强度和细胞存活率状况，选定染毒浓度为20μmol/lBaP作用24小时，建立BaP损伤模型,同时选定五味子乙素浓度为0.1、0.5、2μmol/l。研究发现：与BaP组相比，不同剂量五味子乙素组1中 文 摘 要 能显著降低BaP对HTR-8/SVneo细胞的杀伤作用，提高细胞的存活率，差异有统计学意义（P＜0.05）。2五味子乙素对BaP损伤模型中氧化物质的影响与对照组比较，BaP组细胞ROS、LDH、MDA的表达量显著增加，细胞NOS/NO系统中TNOS、iNOS、eNOS活性增强，NO表达量增加（P＜0.05

8、）。而不同剂量的五味子乙素组与BaP组相比，细胞ROS、LDH、MDA含量均有不