BaP代谢产物BPDE的检测技术及其对DNA损伤的研究

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1、华中科技大学硕士学位论文B（a）P代谢产物BPDE的检测技术及其对DNA损伤的研究姓名：刘琳琳申请学位级别：硕士专业：劳动卫生与环境卫生学指导教师：吴志刚20080501华中科技大学硕士学位论文英文缩略语词汇表B(a)P苯并(a)芘BPDE苯并(a)芘二氢二醇环氧化物CYP1A1细胞色素P4501A1CYP1B1细胞色素P4501B1CYP2B细胞色素P4502BCYP2E1细胞色素P4502E1DMEM改良的Eagle培养基DMSO二甲基亚砜EB溴化乙锭GC-ECD气相色谱-电子捕获检测器HPLC-FD高效液相色谱-荧光检测器H

2、PLC-UVD高效液相色谱-紫外检测器FCS小牛血清LMPA正常熔点琼脂糖NMPA低熔点琼脂糖PAH多环芳烃PCBs多氯联苯PBS磷酸盐缓冲液PCB153多氯联苯153（2,2',4,4',5,5'-六氯联苯）POPs持久性有机污染物RSD相对标准偏差SCGE单细胞凝胶电泳SD标准差1独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人

3、完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位

4、论文B(a)P代谢产物BPDE的检测技术及其对DNA损伤的研究刘琳琳导师：吴志刚摘要苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]，又名3，4-苯并芘，由一个苯环和一个芘分子结合而成,是一种广泛存在于人们生产、生活环境中的污染物。1933年，英国学者从煤焦油中分离出苯并芘（B(a)P），并成功诱发出小鼠皮肤癌，使B(a)P成为第一个被发现的环境化学致癌物。动物实验证明，B(a)P对局部或全身都有致癌作用；流行病学研究表明，B(a)P可以通过皮肤、呼吸道、消化道等多种途径被人体吸收，能够诱发皮肤癌，肺癌，直肠癌，胃癌，膀胱

5、癌等。除致癌外，B(a)P还具有致畸，致突变作用，对人体内分泌系统也有一定的干扰作用。1983年国际癌症机构将其确认为环境致癌物。B(a)P虽然被认为是高活性致癌剂，但并非直接致癌物，必须经细胞微粒体中的混合功能氧化酶激活才具有致癌性。B(a)P在体内首先经混合功能氧化酶细胞色素P450酶(CYP1A1)催化在结构弯区形成7,8环氧苯并芘,然后在环氧化物酶和CYP1B1作用下形成7,8二氢二醇苯并芘,该物质经混合功能氧化酶催化,形成二氢二醇环氧苯并(a)芘(BPDE)。BPDE能够与与体内生物大分子如DNA，蛋白质等结合生成共价化

6、合物，被认为是B(a)P在体内的终致癌物。因此随着B(a)P越来越深入的研究，BPDE的致癌性也受到广泛关注，但是具体作用机制尚不明确。BPDE主要与DNA的小沟上的亲核位点鸟嘌呤的环外胺基端共价结合,产生特异突变,形成BPDE-N2-dG。BPDE加合物能够阻止DNA复制，造成复制阻断，复制准确性降低，诱发加合物对应位点上的碱基误渗，最终出现G-T的转变及部分G-A的错误2华中科技大学硕士学位论文突变，这既是癌变的启动因子，又在癌变发展过程起着关键的作用。B(a)P主要存在于煤焦油、各类碳，石油等燃烧时产生的烟气、汽车尾气中，还

7、有工业废水中及吸烟时香烟产生的烟雾中。另外烧烤和熏制食品也含有大量的B(a)P。因此除了职业暴露外，我们在生活中也会经常接触到B(a)P。鉴于B(a)P对人类的危害性，这几十年来已经有大量的研究报道了B(a)P的终致癌物质BPDE的检测方法，但其绝大部分的研究都是着重于检测BPDE的DNA﹑蛋白加合物或BPDE加合物的水解产物进行定性，定量分析，这些方法前处理步骤繁多致使BPDE加合物的回收率低。因此如果能够选择直接BPDE，不仅简单易行，可以提供个体“内接触”量或“有效接触”量，还能提供化学毒物的代谢活化信息。在本研究中，采用高

8、效液相色谱-紫外检测和荧光检测法对BPDE标准品溶液及细胞液中的BPDE进行检测，为进一步研究BPDE的定性和定量分析奠定基础；用单细胞凝胶电泳方法检测了BPDE对体外培养的HepG2细胞的DNA损伤，以期反映BPDE对遗传物质的损伤；最后是对B(