喜树内生真菌及其次级代谢产物的研究

《喜树内生真菌及其次级代谢产物的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。作者签名：关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。中

2、南大学硕士学位论文摘要喜树碱作为特异性DNA拓扑异构酶抑制剂，是一种具有良好抗癌效果的有效成分。但是由于其在喜树植物中含量极低，提取困难，而且结构复杂，难以通过化学合成的方法得到。因此，植物内生真菌作为喜树碱新型的药用资源已引起了广泛的关注。本文从喜树树皮中共分离得到约50株内生真菌。以喜树碱标准品为对照，利用薄层色谱、紫外分光光度法以及高效液相色谱法，筛选出一株产喜树碱的内生菌株EFCI．13。通过形态学鉴定，将其归为青霉属。为了提高喜树碱的产量，对菌株EFCI．13的发酵培养基进行了优化。通过单因素实验选定的最佳碳源为葡萄糖，氮源为酵母膏和硫酸铵。Plack

3、ett-Burman实验表明影响喜树碱的主要因素为葡萄糖，磷酸二氢钾和L．色氨酸。最陡爬坡实验确定了这些主要因素的零点值。通过Box-Behnken实验和响应面分析，得到最佳发酵培养基为葡萄糖10．489／L，磷酸二氢钾2．919／L，L．色氨酸O．14Sg／L，酵母膏159／L，硫酸镁0．5g／L，硫酸铵0．8g／L，氯化钙0．1g／L，在此条件下喜树碱的最大产量为80．41耀皿。经过实验验证，在该培养基条件下，喜树碱产量达80．39耀．几，比优化培养基前的产量提高了43．9％。随机选择了36对PCR-SRAP引物对喜树内生真菌进行研究，筛选出了6对稳定性好，

4、扩增条带多的引物组合。这6对引物组合共扩增出425条条带，其中365条为多态性条带，多态性条带的比例为85．9％。在相似系数为0．54时，菌株可分为三大类。说明了SRAP方法可用于喜树内生真菌的多态性分析。关键词喜树碱内生真菌响应面法培养基SRAP中南大学硕士学位论文ABSTRACTCamptothecin(CPT)，specificallyinhibitsDNAtopoisomeraseI，isapotentantineoplasticagent．However,it’SdifficulttoobtainCPTtomeetthelargeneedbyextra

5、ctionaswell裙chemicalsynthesisduetothelOWcontentinplantsandcomplexstructure．Thus，endophyticfungihavebecomeimportantsourcesforCPTproduction．About50endophyticfungiwereisolatedfrombarksofCacurninata．ThemetaboliteswerescreenedbyTLC，UVandHPLC，EFCI．13wasconsideredtoproduceCPT．ThefungusWasid

6、entifiedasaPenicilliumbasedonit’smorphologicalfeatures．Statisticalexperimentaldesignswereusedtooptimizethefermentationmediumformaximumcamptothecin(CPT)production．Glucose．yeastextractandsulfateammoniumwereselected嬲thesuitablecarbonsourcesandnitrogensourcesviaone．factor-at-a-timedesign

7、．111emostimportantfactorsinfluencingCPTproduction,asidentifiedbyPlackett-Burmandesign(PBD)，wereglucose，KH2P04andL．Trp．SteepestascentmethodWasusedtodeterminethecenterpointofthesesignificantvariables．Box-Behnkendesign(BBD)andresponsesurfaceanalysispredictedamaximumCPTyieldof80．41嵋／Latg

8、lucose10．489