三株植物内生真菌次级代谢产物的研究

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1、上海交通大学博士学位论文三株植物内生真菌次级代谢产物的研究姓名：胡德军申请学位级别：博士专业：生物医学工程指导教师：赵凤生20081101HCCBl778．3为4’，5，7．三羟基异黄酮，分子量270，对A549、LoVo细胞均具有很强的抑制作用，其中HCCBl778．3对LoVo细胞的抑制率最高，可达78．95％，目前HCCBl778．3已经开发为药物；HCCBl778．4为链格孢毒素(Altertoxin．I)，分子量为352，具有较强的诱变作用和一定的抑制血小板聚集的作用；HCCBl778．5(新化合物)化学命名为1，4，9，

2、12．四羟基．1，2，12，12a．四氢茈．3，IO(1lH，12bH)．二酮，为HCCB01778．4同系物，分子量352，是首次分离得到的新化合物，具有一定的抗肿瘤活性。对菌株HCCB2310次级代谢产物的分离研究得到两个化合物，分别为3，22，24．三羟基．齐果墩烷．12．烯和琥珀酸。为了快速分离得到菌株HCCBl614活性成分，本研究利用传统方法和高速逆流色谱法结合对其活性代谢产物进行了分离。选取两相溶剂系统为正己烷．乙酸乙酯．甲醇．水(1：3：3：3)，体系上相为固定相，下相为流动相。成功地从内生真菌HCCBl614的次级

3、代谢物中快速分离得到一细胞毒活性组分。经高效液相色谱分析，其纯度为99％以上。其化学结构由1H-NMR和13C．NMR鉴定确认为CytochalasinN。从菌株HCCB1778次级代谢产物中分离得到的AltertoxinI(ATXI)是一种链格孢霉菌产生的真菌毒素，一直被认为是一种重要的食品和粮食的污染物。最近研究表明AltertoxinI具有很好的抗凝血作用，能够阻止血小板聚集，IC50为29I．tM，因此具备作为药物开发的潜力。为了得到足够量的AltertoxinI用于进一步的研究和开发，本研究首次建立了一种利用高速逆流色谱一

4、次性分离制备ATXI的方法。实验利用溶剂体系正TT己烷．乙酸乙酯．甲醇．水(2：5：5：6)对发酵产物的萃取物进行分离，利用HPLC分析以及质谱和核磁共振波谱对目标产物进行鉴定。结果表明该方法每次可以分离得到毫克级的目标产物。本研究从18L发酵产物中共分离得到45mgAXTI，纯度可以达到95％以上。因此该方法将为以后AXTI的快速分离制备提供有效的帮助。关键词：植物内生菌，筛选，分离，纯化，次级代谢产物，高速逆流色谱，抗肿瘤活性IIISTUDYoNTHEMETABoLITESPRoDUCEDBYTHREEBIOACTIVEENDo

5、PHYTICFUNGIABSTRACTEndophyteisaspecialandimportantgroupofmicroorganismswithtaxonomicdiversity,whichcanproducevariousbioactivesubstances，includinginsecticidal，antimicrobialandantitumorcompoundsetc．Inthisresearchwork，alargeamountofendophyteshadbeenscreenedbasedonseveralm

6、odelsanddozensofstrainsshowedactivities．Threeofthemweretaxonomicallyidentifiedandtheirsecondarymetaboliteswerestudied．Thefermentationsampleswerepreparedfrom1280strainsofendophytes．Afterprimaryandsecondaryscreeningontwomodels，28samplesshowedhi曲andstableantitumoractiviti

7、eswhile8samplesshowedstrongantibioticactivities．Amongthem，thestrainsHCCB1614，HCCB1778andHCCB2310wereselectedforfurtherstudy．Accordingtotheirmorphology,culturalcharacteristics，18SrDNAandITSsequences，thestrainsHCCB1614，HCCB1778andHCCB2310wereindentifiedasPhomopsissp．，Alt

8、ernariasp．andAscospermumsp·，respectively．Fivecompoundsfromthemetabolites，namedasHCCB1778-1～5IVrespectively,werepurifi